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第五章 分子发光分析 §3. MFA及其应用 、荧光分析法的特点 1.灵敏度高 比UV-Vis高出2~4个数量级。原因有2： （1）UV-Vis：亮背景检测 MFA: 暗背景检测 （2）If∝I0，可以通过增大I0来增大If I0↑， It↑, A基本不变 2.选择性强 两个光谱 激发光谱 发射光谱 { 如果激发光谱重叠，可用发射光谱。 反之亦然 3.试样量少、方法简便 4. 提供较多的物理参数 5. 缺点：应用范围不广，对环境因素敏感，干扰因素也较多 * * §1. 基本原理 一、荧光和磷光的产生 光致发光 基态分子 价电子跃迁到激发态 光照激发 基 态 发出荧光或磷光 一 电子自旋状态的多重性 电子激发多重度：M=2S+1 S：电子自旋量子数的代数和。取0或1 基态单重态 S0 激发单重态 激发三重态 S1, S2, S3分别表示第一, 二, 三激发单重态 单重态：电子自旋相反，↑↓ S=0，M=1 T1,T2,T3分别表示第一,二,三激发三重态 EsingleEtriple 三重态：电子自旋平行，↑↑/↓↓ S=1，M=3 S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 内转换 振动弛豫 二去活化过程 非辐射跃迁（热） 辐射跃迁 （光） { 振动弛豫 S0 S2 S1 T1 吸光?2 吸光?2 振动弛豫 10-12 s 2. 内转换 S0 S2 S1 T1 吸光?2 吸光?1 内转换 Sn→Sn-1；Tn→Tn-1 10-13~10-11s 3. 荧光发射 S1（V=0）→S0（V）（V=0，1，2，3……） lemlex（ex=excitation 激发；em=emission发射） S2 S0 S1 T1 吸光?2 吸光?1 荧光?3 荧光 10-9~10-7s 4. 系间跨越 S0 S2 S1 T1 吸光?1 吸光?2 荧光?3 系间跨越 10-6~10-2s 5. 磷光发射 T1（V=0）→S0（V）（V=0，1，2，3……） 10-4~10s S0 S2 S1 T1 吸光?2 吸光?1 荧光?3 磷光 磷光 6. 外转换 F或P的“熄灭”或“猝灭”过程 S0 S1 S2 T1 吸光?1 吸光?2 荧光?3 磷光 外转换 S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 内转换 振动弛豫 二、荧光（磷光）的激发光谱和发射光谱 １.　激发光谱 固定发射波长lem，扫描激发波长lex ２.发射光谱 固定激发波长lex，扫描发射波长lem 3.合并 lexlemlp 4. 寻找lex和lem （1）连续改变lex（或lem），寻找稳定出峰的波长 （2）扫描三维荧光 5.荧光光谱的特性 （1） lem lex （2）荧光发射光谱的形状与激发波长lex无关 △l=lem –lex Stokes位移 荧光都是从第一激发态的最低振动能级向基态跃迁所产生 （3）荧光的激发光谱和发射光谱呈镜像对称 三、荧光量子产率 分子发射荧光的条件： （1）分子的结构必须激发光的频率相适应。 （2）必须具有一定的量子产率。 荧光量子产率： ：荧光发射过程的速率常数， 决定于分子的化学结构 :其它相关过程的速率常数之和。主要决定于化学环境，同时也与化学结构有关。 四、荧光强度If与溶液浓度C的关系 把 展开 当I0与l一定时 只有在稀溶液中成立 五、荧光与分子结构的关系〈经验规则〉 1. 跃迁类型 ?—?* n—?* 荧光效率较高 2. 共轭效应 共轭程度↑ 量子产率jf ↑ lem↑ → → 荧光强度↑ → 3. 刚性平面结构 酚酞（无荧光） 荧光素（有荧光） 芴（jf = 1） 联苯（jf = 0.18） 刚性平面结构↑ → 荧光强度↑ → lem↑ 4. 取代基效应 给电子取代基：-OH; -OR; -NH2; -NR2; -CN If ↑ 吸电子取代基：-COOH; -C=O; -NO2; -NO; -X If↓ 重原子 → 荧光↓ 磷光↑ 高原子序数的原子 六、影响荧光强度的因素 1. 溶剂 If ↑ 溶剂极性↑ → （不完全通用） 2. 温度 If ↓ 温度↑ → 3. pH值 { 物质的存在形式变化 配合