DNA提取各种缓冲液的配制.docVIP

植物总DNA的提取 一、所需仪器设备及消耗品 剪刀、塑料袋（封口）、冰箱、棕色广口瓶（1000、500、200、100、50ml）、量筒（1000、500、100、10ml）、烧杯（1000、500、200、100ml）、pH试纸、电子天平、高压灭菌锅、研钵、液氮罐（液氮）、水浴锅、离心机、移液器（1套）、枪头（1ml、200ml、20μl）CTAB、NaCl、EDTA-Na2·2H2O、Tris、冰乙酸、硼酸β-巯基乙醇NaAc、氯仿（三氯甲烷）、异戊醇、无水乙醇、溴酚蓝、琼脂糖、蔗糖、溴化乙锭（EB）、RNase、NaOH、HCl（浓）、ddH2O 三、各种缓冲液的配制 （一）2%CTAB提取缓冲液（300ml）（高压灭菌） 4mol/L的NaCl 35×3=105ml 1mol/L的Tris-HCl 10ml×3=30ml 0.5mol/L的EDTA 4ml×3=12ml CTAB 2g×3=6g （二）1×TE（母液pH8.0）（50ml）（高压灭菌） 1mol/L的Tris-HCl（pH8.0） 500μl 0.5mol/L的EDTA（pH8.0） 100μl 最后加ddH2O定容到 50ml 工作液为0.1×TE（45ml灭菌的ddH2O中，加入5ml已灭菌的1×TE） （三）4mol/L的NaClmol/L的NaClμl）（用于配制RNase储存液） 取4mol/L的NaClμl，加300μl灭菌的ddH2O。 （五）3mol/L的NaAc溶液（pH5.2）（50ml）（高压灭菌） NaAc·3H2O 20.405g 加ddH2O 30ml 用冰乙酸调节pH至 5.2 加ddH2O定容到 50ml （六）RNase储存液（10mg/ml）（1ml） 1mol/L的Tris-HCl（pH7.5） 10μl 1mol/L的NaCl μl RNase 10mg 沸水浴15~20min （七）EB储存液（1mg/ml） EB 30mg ddH2O 30ml 磁力搅拌至完全溶解，装入棕色瓶，铝箔包裹，保存于室温。 制胶时EB终浓度为0.5μg/ml（30ml加15μl、40ml加20μl） （八）10×TBE缓冲液（电泳缓冲液）（高压灭菌） Tris碱 54g 硼酸 27.5g 0.5mol/L的EDTA（pH8.0） 20ml 以上溶于400ml的ddH2O中，在定容到500ml 工作液为1×TBE或0.5×TBE （九）6×上样缓冲液 0.25%的溴酚蓝（2.5mg/1ml 40%（w/v）的蔗糖水溶液） 40%（w/v）蔗糖水溶液（2g/5ml的ddH2O，加热溶解，注：温度不能太高） （十）1mol/L的HCl溶液（不用灭菌） 8.62 ml的浓盐酸，加灭菌ddH2O 91.38ml，混匀，室温保存（100ml）。 （十一）5mol/L的NaOH溶液（50ml，10g的NaOH溶于50ml灭菌的ddH2O中）（不用灭菌） 200g的NaOH，溶于灭菌的ddH2O中，定容至1000ml （十二）1mol/L的Tris-HCl（pH8.0）（100ml）（高压灭菌） 12.11g的Tris碱 80ml的ddH2O 加浓盐酸调节pH值至8.0（大约加4.2ml） （十三）0.5mol/L的EDTA（pH8.0）（50ml）（高压灭菌） 9.305g的EDTA-Na2·H2O 1g的NaOH 磁力搅拌器剧烈搅拌 40ml的ddH2O 最后加水定容到50ml，用NaOH调节pH值至8.0 DNA定量用紫外分光光度计法，1 OD50μg/ml双链DNA。 PCR（聚合酶链反应） 一、所需仪器设备及消耗品 冰箱（4℃、20℃）、高压灭菌锅、离心机、移液器（1套）、枪头、枪头盒、PCR管（包括盒和架）、PCR仪、离心管（包括盒和架）、一次性手套、电泳仪、电泳槽、凝胶引物（1、2）、4×dNTP、DNA模板、buffer（MgCl2）、TaqDNA聚合酶、ddH2O5×TBE电泳缓冲液 三、PCR反应体系与反应程序 仅供参考 成分 母液浓度 各成分加入量（μl/20μl） 各成分终浓度 或含量 无离子水 9.7 缓冲液（buffer） 10× 2 1× MgCl2 25mmol/L 1.2 1.5 mmol/L 4×dNTP 2mmol/L 2