探讨血小板冰冻保存后血小板新亚群的产生和其获得新特性的分子基础.docVIP

　　探讨血小板冰冻保存后血小板新亚群的产生和其获得新特性的分子基础 --Abstract:Objective　To explore the molecular basis of neolecules of cryopreserved platelets and fresh platelets, bin or calcium ion, etry.Results　The cryopreservedplatelets eters including phosphatidylserine (PS), CD62p and CD42b. Their distinct characteristics are positive PSand significantly decreased CD42b.paredto fresh platelets, the subpopulation that is both PS and CD62p negative ismore sensitive to 2.5 mmol/L calcium stimulation to express CD62p.Conclusion　After cryopreservation, neolecules may explain the decreased in vivo re-covery and increased immediate hemostatic function of cryopreserved platelets. Key etry　 摘要:目的　探讨血小板冰冻保存后血小板新亚群的产生和其获得新特性的分子基础。方法　采用流式细胞术在不同条件下比较分析新鲜血小板和冰冻保存血小板膜表面功能分子表达变化差异。结果　根据表达和再表达CD62p能力不同可将冰冻血小板分为三个亚群,CD62p再表达率为51.7%±7.8%;新鲜血小板只有一个明显的亚群,CD62p再表达率为98.3%±0.6%。结合磷脂酰血液疗法论文写作丝氨酸(PS)、CD62p和CD42b分子变化可将冰冻血小板分出新的亚群,其显著特征包括PS阳性和CD42b分子密度显著降低;而CD62p阴性亚群对钙离子的激活更为敏感。结论　血小板通过冰冻保存后,产生了新亚群。新亚群膜表面功能分子的变化及其表达能力改变可能与其体内存活率减低而即刻止血功能增强密切相关。 关键词:血小板　冰冻保存　亚群　流式细胞术　　 笔者采用流式细胞术,对血小板新亚群的产生及其膜表面分子重新分布和多种激活标志分子表达进行多参数分析,并与新鲜血小板进行比较,探讨冰冻保存后血小板的新特性的获得与其新亚群的产生之间的可能关系。 1材料与方法 1#8226;1　主要仪器和试剂　FACSCalibur流式细胞仪和CELLQuest分析软件(Becton Dickinson);PerCP标记抗CD61抗体(Becton Dickinson);RPE标记抗CD62p抗体(PharMingen);FLOUS标记AnnexinⅤ(Boehringer Mannheim); PE标记CD42b抗体(PharMingen);FITC标记CD42b抗体(PharMin-gen);GPRP (Sigma);改良TBS:(NaCl 137mmol/L; KCl 2. 8mmol/L; NaHCO312mmol/L; HEPES10mmol/L; NaH2PO40.4 mmol/L;D-glycose 5.5mmmol/L;EDTA 1.1mmol/L pH7.4),用前25℃水浴15min;Hepes缓冲液(Hepes 10mmol/L; NaCl137mmol/L;KCl 2.8mmol/L;MgCl21mmol/L;Ca-Cl22.5mmol/L;pH 7.4);多聚甲醛溶液。 1.2　血小板　ACD抗凝全血(200ml)分离的新鲜富含血小板血浆(FPRP)10人份。所有血小板均来自体检合格的一周内未服用阿司匹林等抗血小板药物的志愿供者。 1.3　方法及观察指标　血小板冰冻保存方法同文献[1,2],1周后取出37℃水浴融化。测定每份新鲜血小板及其冰冻保存后血小板下列指标:①血小板的CD62p表达和凝血酶激活后CD62p再表达[3];②钙离子激活后CD62p和磷脂酰丝氨酸(PS)表达分析[4];③膜表面GPIb(CD42b)密度和PS表达分析;④钙离子激活后膜表面GPIb密度和CD62p表达分析。膜表面GPIb密度和PS表达分析方法及钙离子激活后膜表面GPIb密度和CD62p表达分析,这两种分析方法均参照文献[4],将相应的抗CD62p RPE改为CD42b PE或将Annexin V FLOUS改为CD42b FITC即可。 2　结果 2#8226;1　流式细