罗伦隐球酵母脂肪酶纯化及ANS快速测定脂肪酶热稳定性方法的建立.pdfVIP

摘要 中文摘要 脂肪酶作为一种重要的工业用酶，在造纸、医药、食品、日用化工、能源开发 Fast Flow纯化 等领域有着广泛的研究与应用。作者通过过离子交换柱Sepharose B40)脂肪酶，获得了纯度超过95％ 了罗伦隐球酵母B40(Cryptococcus]aurentii 显示N端的1 脂肪酶是一种中低温碱性脂肪酶，较适作用温度为25。C，最适作用pH为10．2，Tm 为40．90。C，能够催化水解中短碳链(12碳以下)的甘油三酯，对混合碳类甘油三 酯也有一定的催化作用。分析了不同金属离子和表面活性剂对该酶的影响，发现重 金属离子对该酶活性的发挥有较强的抑制作用，而能促进脂质溶解的试剂则能较好 地提高酶的催化效用。 脂肪酶的热稳定性是脂肪酶的重要性质之一，热稳定性好意味着储存方便，便 于运输，能够耐受工业生产应用中的高温环境等。寻找一种简单快速的脂肪酶热稳 定性测定法对筛选热稳定脂肪酶的工作有着重要的作用，它能够大大节省实验成本， 提高实验效率，缩短研究到生产实践的周期。本文报道了一种简捷、高通量的脂肪 酶热稳定性测定法——ANS脂肪酶稳定性快速测定方法的建立，该方法可将测定时 间由传统的NaOH滴定法的几天缩短为几小时，而且非常适合高通量脂肪酶热稳定 性的测定。 关键词：罗伦隐球酵母，脂肪酶，热稳定性，ANS，纯化，荧光探针，N端测序，酶 学性质 f． Abstract 一____-_●—--__-l自—-__l--__-_-I-I●_I-_l-l— III li Ill[111 1 l[11[I II} Y1807161 Abstract usedin most use 3．1．1．3)was Asoneofthe industryenzyme，lipase(EC widely from andotherindustrialfields．The chemical lipase industry medicine，food，daily was asa laurentii reportedlipase，Waspurifiedby B40，which DEAE。 CryptoCOCCUS