液相色谱法流动相.ppt

常用化学药品检验方法检验仪器的使用 内容： 高效液相色谱仪器 （高效液相）色谱理论 滴定分析法 高效液相色谱仪 一、结构示意图. 二、部件介绍 一般由输液泵、进样器、 色谱柱、检测器、数据记录 及处理装置等组成。 现在的仪器还一般配置有 在线脱气机、自动进样器、 柱温箱等。制备型HPLC 仪还配备有自动馏分收集装 置。 泵 恒压泵、恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、柱塞往复泵和隔膜往复泵。目前应用的基本上是柱塞往复泵。（单元泵、四元泵、高压二元泵） 柱塞往复泵使用时的注意事项： 1 防止固体微粒进入泵体造成磨损。 2 流动相不应含有对泵体造成腐蚀的化学物质。 3 泵空转也会磨损柱塞，防止流动相跑空。 4 压力过高会使密封环变形，产生漏液。 5 防止流动相中析出盐晶，应开启柱塞冲洗功能。 进样器 主要部件为定量环及六通阀。 使用时应注意： 1 样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损 2 进样量应不大于定量环体积的50% 3 每次分析结束后应冲洗进样阀，现在大部分进样器能自动实现此功能。 部分自动进样器还能实现柱前衍生化等操作。（Agilent） 色谱柱 色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好、分析速度快等。 使用色谱柱时应注意事项： 1 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。 2 应逐渐改变溶剂的组成，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。 3 一般不能反冲，否则会迅速降低柱效。 4 使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。 5 流动相应先脱气，避免气泡进入柱体。 6 测试基质复杂的样品时，应用保护柱。 7 定期用强溶剂冲洗色谱柱，清除驻留在柱内的杂质。 8 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇后塞紧。 高效液相色谱的主要类型及其分离原理 类型（按固定相分子聚集状态和分离机制分）： 分配色谱(液-液色谱)；吸附色谱(液-固色谱)；离子交换色谱；空间排阻色谱；亲和色谱等。 一、液-液色谱 （一）反相键合相色谱 化学键合相：利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面 特点： 不易流失 热稳定性好 化学性能好 载样量大 适于梯度洗脱 1分离机制：分配 + 吸附 疏溶剂理论 流动相与溶质排斥力越强，作用时间↑ ， k↑，组分tR↑ 流动相与溶质排斥力越弱，作用时间↓， k↓，组分tR↓ 2．固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱（十八烷基Octadecylsilyl，简称ODS ） 3．流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 固定相极性 （RP） 底剂+ 有机调节剂（极性调节剂） 例：水（缓冲盐溶液） + 甲醇，乙腈，THF （二）正相键合相色谱 4．流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 5．出柱顺序：极性大的组分先出柱 极性小的组分后出柱 6．适用：非极性~中等极性组分 4．流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓ 5．出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先出柱极性大的组分后出柱 6．适用： 氰基键合相与硅胶的柱选择性相似（极性稍小），分离物质也相似 氨基键合相与硅胶性质差别大，碱性，分析极性大物质、酚、羧酸、核苷酸、糖类、氨基酸等 （也可用作反相固定相，氨基柱不能用于分离甾酮、还原糖） 二.液-固色谱法（或液-固吸附色谱法） 1.特点：流动相为液体，固定相为吸附相。 2.分离机制： Xm + nSa = Xa + nSm K = [Xa][Sm]n / [Xm][Sa]n 3.结论： 显然，分配系数大的组分，吸附剂对它的吸附力强，保留值就大。 4.作用：a.适用分离相对分子质量中等油性试样。 b.对具有不同官能团的化合物和异构体有较高的选择性。 缺点：由于非线性等温吸附常引起峰的拖尾现象。 三.离子交换色谱法 1.分离机制；离子与离子之间的电荷吸引力 2.适用范围；凡能在溶剂中电离的物质一般均可用该法进行分离。 3.交换：KX = [- NR4+X-][Cl-] / [- NR4+Cl-][X-] DX =[- NR4+X-]/[X-]= KX[- NR4+Cl-]/[Cl-] 4.结