透射电镜树脂包埋块中昆虫感受器的定位技术 - 应用昆虫学报.pdf

应用昆虫学报 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆ ＡｐｐｌｉｅｄＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙ　 ２０１３ꎬ５０(５):１４７９－１４８３. ＤＯＩ:１０.７６７９/ ｊ.ｉｓｓｎ.２０９５－１３５３.２０１３.２０３ 透射电镜树脂包埋块中昆虫感受器的定位技术∗ 张燕如　 任利利　 骆有庆∗∗ (北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室　 北京　 １０００８３ ) 摘　 要　 运用透射电子显微镜技术ꎬ可以对昆虫的不同器官上的感受器进行切片观察ꎬ以揭示感受器内部的清晰 构造ꎬ为分析感受器功能提供依据ꎮ 但目前在切片技术中ꎬ准确定位不同类型的感受器存在困难ꎮ 通过将莱卡 ｍｄ２５００荧光显微镜与日立Ｓ￣３４００Ｎ扫描电镜结合ꎬ确定透射电镜树脂包埋块中的昆虫感受器位置ꎬ提高运用透射 电镜观察昆虫感受器超微结构时切片的准确性ꎮ 关键词　 昆虫感受器ꎬ荧光显微镜ꎬ扫描电镜ꎬ透射电镜ꎬ树脂包埋块 Ｍｉｃｒｏｔｏｍｙ ｏｆ ｉｎｓｅｃｔ ｓｅｎｓｉｌｌａ ｅｍｂｅｄｄｅｄ ｉｎ ｒｅｓｉｎ ｂｌｏｃｋｓ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ＺＨＡＮＧ Ｙａｎ￣ＲｕꎬＲＥＮ Ｌｉ￣ＬｉꎬＬＵＯ Ｙｏｕ￣Ｑｉｎｇ∗∗ (Ｔｈｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｓｉｌｖｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ ＥｄｕｃａｔｉｏｎꎬＢｅｉｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＢｅｉｊｉｎｇ　 １０００８３ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ　 Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ (ＴＥＭ)ｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｅｘａｍｉｎｅｍｉｃｒｏ￣ｓｌｉｃｅｓｏｆ ｓｅｎｓｉｌｌａｌｏｃａｔｅｄｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｓｅｃｔ ｏｒｇａｎｓｔｈｅｒｅｂｙｒｅｖｅａｌｉｎｇｔｈｅｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆ ｅａｃｈｔｙｐｅｏｆ ｓｅｎｓｉｌｌａａｎｄｐｒｏｖｉｄｉｎｇｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｉｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ. Ｈｏｗｅｖｅｒꎬｉｔ’ｓ ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ ｔｏａｃｃｕｒａｔｅｌｙｌｏｃａｔｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｙｐｅｓｏｆ ｓｅｎｓｉｌｌａｂｙｍｏｃｒｏｔｏｍｙｆｏｒＴＥＭ. Ｔｈｅｐｒｅｃｉｓｅｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｓｅｃｔ ｓｅｎｓｉｌｌａ ｅｍｂｅｄｄｅｄ ｉｎｓｉｄｅ ｒｅｓｉｎ ｂｌｏｃｋｓｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｕｓｉｎｇ ｂｏｔｈ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ (ＨＡＣＨＩ Ｓ３４００Ｎ) ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ (Ｌｅｉｃａｍｄ２５００). Ｔｈｉｓｎｅｗ ｍｅｔｈｏｄｏｆ ｍｉｃｒｏｔｏｍｙ ｏｆ ｉｎｓｅｃｔ ｓａｍｐｌｅｓｉｎｒｅｓｉｎｂｌｏｃｋｓｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅ ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ ｌｏｃａｔｉｎｇ ｉｎｓｅｃｔ ｓｅｎｓｉｌｌａ ａｎｄ ｓａｖｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｃｏｓｔｓ. Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ　 ｉｎｓｅｃｔ ｓｅｎｓｉｌｌａꎬｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅꎬｓｃａｎｎｉｎｇ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙꎬｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ꎬｒｅｓｉｎ ｂｌｏｃｋ 　 　 昆虫感受器是感受器官的结构和功能单位ꎬ 为实验样品ꎮ 操作时将所用触角和下颚须样品从 是对周围环境和内部各种刺激产生反应的重要结 活体取下后ꎬ经２.５％磷酸戊二醛(加入０.０６％吐 构(许再福ꎬ２００９)ꎮ 研究昆虫感受器的超微结构 温)溶液固定２４ ｈꎬ用磷酸缓冲液(ｐＨ７.２)冲洗 是探索昆虫行为的基础ꎮ 常用的研究手段有扫描 后ꎻ再用１％ 酸２ 次固定ꎬ经磷酸缓冲液充分清 电镜和透射电镜ꎮ 目前透射电镜的修块过程过于 洗后ꎬ再经过乙醇梯度(４５％ꎬ５０％ꎬ６０％ꎬ７０％ꎬ 粗放ꎬ多在光学显微镜下“盲切”ꎬ导致无法准确观 ７５％ꎬ８０％ꎬ８５％ꎬ９０％ꎬ９５％ꎬ１００％ꎬ１００％)脱水 察到重要的感受器类型ꎮ 作者经