菊花不同种质和组织DNA甲基化差异分析.pdfVIP

ANALYSIS OF DNA METHYLATION IN DIFFERENT CHRYSANTHEMUM AND DIFFERENT ORGANIZATION A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Science By Wang Yanjie Supervisor:Prof. Wang Zicheng May,2013 摘 要 充分利用各种分子标记技术对菊花品种进行鉴定，是菊花种质资源保存和育种的基 础。DNA 甲基化是一种重要的DNA 修饰方式，在基因的表达调控中起着重要的作用。 植物生长过程中CCGG 位点常会发生5-mC 的变化，进而调控基因的表达。因此，本研 究采用AFLP 和MSAP 两种DNA 分子标记技术，对中国开封地区 12 个菊花品种，进 行了遗传与表观遗传多样性的分析，并对这两种分子标记技术进行了比较。同时，取菊 花盛花期叶片、脚芽、舌状花三个部位DNA 进行了CCGG 位点甲基化检测。主要研究 结果如下： 利用AFLP 分子标记，对12 个菊花品种的遗传多样性进行分析，6 对引物组合总共 获得306 条谱带(位点) ，平均每对引物51 条。每对引物的多态性谱带百分率从53.7%到 77.2% 。6 对引物共发现多态性位点208 个，占总谱带的67.9%，证明AFLP 应用于菊花 品种鉴定，多态性较高，不同菊花品种DNA 序列差异较大。 利用MSAP 标记分析菊花DNA ，结果显示不同菊花品种总甲基化程度差异不大， 在20.1%~26.1%之间。DNA 全甲基化比例范围在7.7%~13.7% 。而且不同组织部位甲基 化变异模式具有品种特异性。16 对引物中4 对引物多态性较高，可以区分不同菊花品种。 与AFLP 相比MSAP 多态性较低但相差不大，说明其可以用于菊花品种的鉴定，MSAP 技术更适合基因组序列相似但是表型不同或者同一品种不同部位DNA 甲基化信息的鉴 定。 对于菊花不同部位MSAP 检测发现，这些甲基化状态的变化表现为三种类型：A 型， 去甲基化；B 型，DNA 重头甲基化；C 型，不规则变化。从脚芽到舌状花，DNA 发生 甲基化的数目变化相对较少，去甲基化的数目相对较多，最终导致基因组的去甲基化程 度不断增加。总体上讲，DNA 甲基化和全甲基化百分比，在脚芽中最高，盛花期叶片 和舌状花中都会下降。菊花可能通过甲基化和去甲基化的方式调控基因的表达，并最终 决定植株的生长发育和器官分化。 关键词：菊花，表观遗传信息，DNA 甲基化，甲基敏感多态性扩增，扩增片段长度多 态性 I II ABSTRACT Making full use of molecular marker technology to identify chrysanthemum varieties is basis of germplasm conservation and breeding. DNA methylation is an important DNA modification and plays an important role in the regulation of gene expression. In the process of plant g