芥子碱对小鼠肝癌H22的抑制作用和其机制初探.pdfVIP

摘要 摘要 原发性肝癌是恶性肿瘤之首，调查显示我国每年死于肝癌的人数超过11万，占 世界肝癌死亡人数的45％。在临床抗肿瘤药物研究中，源于植物的生物碱一直都是 抗肿瘤药物的重要来源。近年来，生物碱类抗肿瘤作用及其抗肿瘤机制的研究已成 为攻克肿瘤这一世纪难题的重要领域之一。但目前临床上广泛运用的生物碱类药物 均存在毒副作用强、耐药性高、选择性差的缺点，能否找到～种低毒、高效、选择 性好的抗肿瘤药物已成为国内外学者研究的热点。 本研究通过分离、纯化白芥子的主要药效成分——芥子碱，研究其对小鼠肝癌 H22的抑制作用及其机制，为芥子碱的开发应用提供参考。 采用溶剂萃取法分离制备芥子碱，以乙醇与水多次交互重结晶，得到浅黄色针 状结晶芥子碱，得率为O．382％，并采用高效液相色谱法和分光光度法测定其纯度达 95％以上。 通过MTT法和细胞排染法检测芥子碱对小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响， 并通过DNALadder试验检测是否发生凋亡。结果显示：芥子碱对小鼠肝癌H22细 胞增殖有显著的体外抑制作用，且给药组出现不同程度的凋亡特征现象。 昆明小鼠接种H22细胞，分别建立腹水型肝癌H22模型和小鼠肝癌H22实体 瘤模型，观察芥子碱对小鼠肝癌H22的体内抑制作用，HE染色法观察细胞形态。 通过检测胸腺指数、脾脏指数探究芥子碱对小鼠免疫器官的影响，并采用丫啶橙染 色观察细胞凋亡形态，琼脂糖凝胶电泳及免疫组织化学法研究芥子碱的诱导细胞凋 亡机制。实验结果显示：芥子碱对小鼠肝癌H22实体瘤有显著的抑制作用，存在剂 量依赖效应，且未出现明显毒副作用，而对腹水型H22小鼠的生命延长无显著改善。 凋亡机制探究发现芥子碱可以促进促凋亡因子Bax表达、抑制抗凋亡因子Bcl．2的 表达。 关键词芥子碱：小鼠肝癌H22；抗肿瘤；细胞凋亡；RP．HPLC；Bax／Bcl一2 j 一 ¨ Abstract 舢Y 姗1 舢8㈣0肿6M5㈣9脚8 Abstract liver oneofthemostcommon Primarycancer(PLC)is malignanttumor,which threats tohumanhealthandlife．Statisticsshowedthat seriously PLCkillsanestimated 110000 oftotal deathseach extracted people，orforty—fivepercent global year．Alkaloid from is a to plantsalwaysvery resourcesanti-tumor important drugs．However,thedrugs that wereused inclinichavesome as extensively defects，suchhightoxicity,poor specificity．The oflow of developmenttoxicity,highefficiency,andgoodspecificity anti—tumorhas drugsbecomeahotissueinallOVertheworld．