第13章 高效液相色谱法(新.pptVIP

第10章 高效液相色谱法 13.1 HPLC概述 13.2 HPLC分类与基本原理 13.3 各类高效液相色谱法 13.4 固定相 13.5 流动相 13.6 高效液相色谱仪 13.7 定性、定量分析方法 13.8 应用与示例 13.1 HPLC概述 1. 基本概念与特点 2. HPLC与经典LC的比较 3. HPLC仪器结构 13.1 HPLC概述 概念：高效液相色谱法是在20世纪60年代末，以经典液相色谱为基础，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高效固定相、高压输液泵和高灵敏度在线检测器，从而发展起来的一种新型分离分析技术。 特点：适范围广、分离性能好、分析速度快、流动相可选择范围宽、灵敏度高、操作自动化等。 13.1 HPLC概述 HPLC与经典LC的比较一览表 13.1 HPLC概述 HPLC仪器结构示意图 13.2 HPLC分类与基本原理 13.2 方法分类与基本原理 HPLC与GC在基本原理、概念和方法基本上相同，主要差别是流动相的性质不同。因此，某些公式的表现形式或参数的含意有些差别。 (1) HPLC中的van Deemter方程表现形式：H=A+Cu 13.2 HPLC分类与基本原理 (2) HPLC中涡流扩散和传质阻力对柱效的影响 13.2 HPLC分类与基本原理 (3) HPLC分离条件选择 ① 采用小颗粒、窄粒度分布的球形固定相、首选化学键合相，匀浆法装柱； ② 采用低黏度流动相、低流速(1mL/min)； ③ 柱温保持在25-30℃为宜。 13.3 各类高效液相色谱法 13.3.1 液-固吸附色谱法 13.3.2 液-液分配色谱法 13.3.3 化学键合色谱法 13.3.4 其他色谱法 13.3 各类高效液相色谱法13.3.1 液-固吸附色谱法 分离机理 吸附色谱法是被分离的组分分子与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心，靠组分分子的吸附系数的差异而分离。 在吸附色谱中，选择使用条件使组分间的分配系数K产生差别，以达到分离的目的。由于表面积S不易测，而k=KS/Vm，因此常用k代替K来填料问题。 13.3 各类高效液相色谱法13.3.1 液-固吸附色谱法 影响容量因子的因素 以硅胶吸附剂为例 (1) 硅胶的活性 硅胶必须保持干燥，遇水会失活，烘干可再生。使用硅胶柱进行色谱分离时，必须使用不含水的流动相。硅胶活性越大，k越大，tR越长。 (2) 溶剂的极性 与硅胶吸附剂配套的流动相，是以烷烃为底剂加适当极性调整剂，组成二元或多元溶剂系统。溶剂的极性越大，k越小，tR越短。 (3) 容量因子序 组分的极性越大，在硅胶吸附剂表面的保留作用(亲和力)就越强， k越大，tR越长。 13.3 各类高效液相色谱法13.3.2 液-液分配色谱法 分离机理：分配色谱法是由于样品组分溶入固定相与 流动相达到“平衡”后分配系数的差别而分离。不同组分在固定相与流动相中的溶解度差别越大(K、k差别也大)分离效果越好。 正相液-液色谱法：极性：流动相＜固定相。极性小的组分先出峰、极性大的组分后出峰。 反相液-液色谱法：极性：流动相＞固定相。极性大的组分先出峰、极性小的组分后出峰。 13.3 各类高效液相色谱法13.3.3 化学键合相色谱法 将固定液的官能团键合在载体的表面就构成了化学键合相，以此为固定相的色谱法称为化学键合相色谱法(bonded phase chromatography，BPC)。 化学键合相既有分配作用，又有吸附作用，应用广泛 13.3 各类高效液相色谱法13.3.3 化学键合相色谱法 正相键合相色谱法 反相键合相色谱法 离子对色谱法 离子抑制色谱法 13.3 各类高效液相色谱法13.3.3 化学键合相色谱法 正相键合相色谱法 固定相：极性大的化学键合相，如氰基、氨基化学键合相；流动相：极性小的烷烃(正己烷)加适量极性调整剂构成。 分离机理 主要靠范德华力(定向、诱导)或氢键作用力的差别而分离。 流动相的极性与容量因子的关系 流动相极性增大，洗脱能力增加，k减小、tR减小。 13.3 各类高效液相色谱法13.3.3 化学键合相色谱法 反相键合相色谱法 RBPC 典型的RBPC：非极性键合固定相＋极性流动相组成。固定相：ODS；流动相：甲醇-水，乙腈-水。非典型RBPC：弱极性或中等极性键合相＋极性大于固定相的流动相组成。 分离机理 疏溶剂理论、双保留理论、顶替吸附-液相相互作用模型等。 流动相的极性与容量因子的关系 流动相的极性增大，对组分的洗脱能力降低， k增大、tR增大；反之， k减小、tR减小。 13.3 各类高效液相色谱法13.3.3 化学键合相色谱法 离子对色谱法 有正相、反相之分，常用反相的。 反相离子对色