011高三生物二轮专题复习课件：酶的应用和生物技术在其他方面的应用.pptVIP

考点3　DNA和蛋白质技术 1．多聚酶链式反应扩增DNA片段 细胞内DNA复制与体外DNA扩增(PCR技术)的比较 细胞内DNA复制 PCR 不同点 解旋 解旋酶，边解旋边复制 80℃～100℃高温解旋，双链完全分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶 TaqDNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 能量 ATP 不加 温度 体内温和条件 高温 子链合成 一条链连续(先导链)，另一条链不连续，先合成片段，再由DNA连接酶连结(滞后链) 两条子链均连续合成 循环次数 受生物体自身控制 30多次 相同点 ①提供DNA模板 ②四种脱氧核苷酸作原料 ③子链延伸的方向都是从5′端到3′端 ④都需在一定的缓冲溶液中进行 2.血红蛋白的提取和分离 (1)实验原理：依据蛋白质的各种特性可以将不同种类的蛋白质分离。 (2)常用方法 ① ：根据相对分子质量的大小分离蛋白质。 ②电泳：利用待分离样品中各种分子 及 、 产生不同的迁移速度，由此将各种分子分离。 (3)蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、 、 和纯 度鉴定。 带电性质的差异 分子本身大小 形状的不同 粗分离 纯化 凝胶色谱法 【例3】 Ⅰ.某生物兴趣小组在学习完“蛋白质的提取和分离”后，联系相 关实验，准备从猪肝脏研磨液中初步提取过氧化氢酶，设计的“过氧 化氢酶提取、分离流程图”如下： 蛋白质粗分离 （透析） 试回答下列有关问题： (1)向肝细胞悬液中加入一定量的pH＝7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破 碎肝细胞，破碎细胞的原理是_____________________________________________________________。 与使用蒸馏水相比，使用缓冲液的优点是___________________________________________________________。 (2)蛋白质粗分离阶段透析的目的是__________________________。 (3)电泳利用了待分离样品中各种分子的____________________________ 等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。 渗透原理(当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水涨破) 可以保证酶溶液pH基本稳定，避免因pH变化影响过氧化氢酶活性 除去小分子化合物(杂质) 带电性质、分子大小、形状 (4)实验小组以3%过氧化氢溶液和获得的过氧化氢 酶为材料进行温度对酶催化活性影响的探究，得到 右图所示的结果，根据实验结果得出“过氧化氢酶 能耐受100℃高温”的结论，请问这一结论是否可 靠？为什么？ ________________________________________________________________ 不可靠，高温也能使过氧化氢分解 Ⅱ.多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。请回答 下列有关PCR技术的基本原理及应用问题。 (1)DNA的两条链是反向平行的，通常将___________的末端称为5′端，当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的 ________开始延伸DNA链。 (2)PCR利用了DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题，但又导 致了DNA聚合酶失活的新问题。到20世纪80年代，科学家从一种Taq细 菌中分离到______________________，它的发现和应用解决了上述问题；要将Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来，所用的培养基叫________________。 3′端 磷酸基团 耐高温的TaqDNA聚合酶 选择培养基 (3)PCR的每次循环可以分为__________________三步。假设在PCR反应 中，只有一个DNA片段作为模板，请计算在5次循环后，反应物中大约有 ________个这样的DNA片段。 (4)请用简图表示出一个DNA片段PCR反应中第二轮的产物。 答案： (5)简述PCR技术的主要应用。 _____________________________________________________________ (要求3项以上)。 变性、复性和延伸 32 遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DNA序列测定 听课心得 审题关键：“过氧化氢酶”、“缓冲液”、“透析”、“PCR”、“反向平行