RNA干扰的研究.docVIP

RNA干扰的研究 摘要：RNA干扰是指由dsRNA介导的特异靶序列mRNA基因沉默的现象，自1998年发现以来，在分子生物学研究方面已取得重大进展。特别是在哺乳动物中的应用研究，构建稳定表达siRNA载体，有效筛选siRNA靶序列方面取得了突破，而且在基因功能研究，遗传病的基因治疗，胞内抗病毒免疫，机体水平应用研究方面也有了重大进展。 关键词：RNA干扰；基因沉默；靶序列；引物；发卡结构 The research of RNA interference Henan Zhang (07 Biological Class, Medical College of Sun-yat sen university) Abstract：phenomenon of specific mRNA gene silence caused by the interposition of dsRNA . Since discovered in 1998, RNAi has got great progress on Biology research. People have got breakthrough especially on the appliance research of mammals, the built of the stable siRNA carrier and the efficient selection of siRNA target sequence. And people also got great progress on gene function research, gene therapy of heredopathia, endocell anti-viral immunity and appliance research of body level. Key words: RNA interference; gene silence; target sequence；prime；hairpin RNA干扰（RNAi）真正被确定是Fire于1998年在秀丽线虫中发现了转录后的基因沉默［1］，并且引起了分子生物学家和遗传学家等的很大兴趣。RNA干扰广泛存在于各种生物中包括：从真菌到植物，从无脊椎动物到哺乳类动物等几乎所有真核生物。并很快从对线虫的研究扩展到了对锥虫、果蝇、脊椎动物以及医学肿瘤［2］、微生物［3，4］、遗传病基因治疗、基因功能研究［5］等多个领域。 1.RNA干扰的发现历史： 最初在1990年，Jorgensen等［6］在研究怎样增多矮牵牛花的颜色时，就观察到一种当时无法解释的现象：希望通过导入紫色色素合成酶基因增加色素基因拷贝，从而得到紫色加深的矮牵牛花；但结果确是，一些矮牵牛花的紫色不但没有加深，反倒使开出的花呈部分或全部的白色。进一步的研究说明，这些导入的基因非但没得到表达，并且使矮牵牛花自身的基因表达受到了抑制。作者当时称之为共抑制（cosuppression）。 到了1994年，Cogoni［7］等发现：向链孢霉菌中转入albinol(al-l)或albino3(al-3)基因后，内源性al-1或al-3基因表达水平大大降低。当时将这种真菌中的基因表达抑制现象叫做消除作用(quelling)。 1995年Guo等［8］在研究秀丽线虫胚胎的第一次卵裂时发现，给它注射par-1基因的反义RNA可以阻断par-1的转录和翻译，但是对照组中的正义RNA也得出了同样的结果。 1998年Fire等［9］用RNA聚合酶在体外转录出了与秀丽线虫发育等相关基因的正、反以RNA，并且纯化之后导入秀丽线虫，发现导入的RNA可以抑制基因的表达，并且dsRNA比ssRNA效果更好，从此将这种现象命名为RNA干扰（RNAi）。并且发现，dsRNA经过秀丽线虫肠道注射时，所产生的RNAi可以在细胞间传递并传至子代。 2．RNA干扰的基本原理 RNA干扰(RNAi)指发生在动植物中由dsRNA指导的mRNA序列特异性降解的现象，它分为启始阶段和效应阶段两个阶段。对于哺乳动物的细胞，启始阶段中细胞内RNaseⅢ dicer从dsRNA链两端进行切割，产生19-23个核昔酸的dsRNA片段，即小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA) ，其3端含有2一3个核苷酸突出端，5端磷酸化。效应阶段为:siRNA进入RNA诱导的沉寂复合物(RISC)，并且RISC复合物是蛋白质-RNA效应子核酸酶复合体。siRNA进人后，由于位置构象原因而被解链成正义链和反义链，由反义链引导RISC和与之互补的靶RNA杂交，一旦与靶RNA杂交后，RISC上的核酸酶以则一定的间隔，在被识别的2个核昔酸序列的中部进行切割，