乙型肝炎基因分型方法进展及其临床意义.doc

乙型肝炎基因分型方法进展及其临床意义 欧志英　何蕴韶 （1中山大学基础医学院, 达安基因诊断中心, 广州 510080） （2中山大学基础医学院, 解剖学教研室, 广州 510080）【摘要】乙型肝炎病毒是严重危害人类健康的病毒之一，我国是慢性乙型肝炎的高发区，不同基因型乙型肝炎病毒的致病性及其受感染病人的预后差异很大。针对S基因的乙型肝炎病毒基因分型方法包括限制性片段长度多态性分析、型特异性引物PCR、型特异性探针核酸杂交分析和直接序列分析等。【关键词】乙型肝炎病毒；基因分型；核酸检测 Detection Method and Clinic Significance of HBV Genotyping OU Zhi-Ying1,2　He Yun-Shao1,2 （1DaAn Gene Diagnostic Center of Sun Yat-Sen University,Department of Human Anatomy of Zhongshan Medical School, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510080, China）【Abatract】Hepatitis B virus (HBV) is the most common infectious virus that affects people all over the world; HBV genotyping is of important to clinic practice.the current method of HBV genotyping mainly aims at the S gene of HBV genome, include the Restriction Fragment Length polymorphism(RFLP), sequencespecific oligo nucleotide primer(PCR-SSP) and direct DNA sequencing analysis and so on. 【Key words】HBV；Genotyping；Nucleic acid diagnose 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是严重危害人类健康的病毒之一，是重要的肝脏疾病致病因子。世界上有20亿人感染过HBV，目前全世界慢性HBV感染患者至少有3.8亿，其中慢性HBV携带者75%分布在东南亚和次撒哈拉地区，而我国就占了1.5亿，其中有2000万人为慢性乙肝患者，每年因此病死亡的人已近50万［1,2］。慢性乙型肝炎病毒感染者中50%～75%有活跃的病毒复制和肝脏炎症，感染的自然病程漫长，可持续30～50年。持续慢性HBV感染在临床上可表现为各种不同类型的疾病，包括无症状携带状态，急、慢性肝炎和肝硬化等，严重的可能发展为原发性肝癌（HCC）。中国、东南亚和非洲的50％肝硬化和70～90％肝癌，由慢性HBV感染引起，7～30％的HBV携带者感染了HBV变异体［3］。 1　HBV的基因组特点 HBV是已知最小的DNA病毒，由正负两条链组成，长链（负链）长约3.2 Kb，基因组简单、高度压缩、重复利用，为独特的带有部分单链区的环状双链模式，负链编码病毒蛋白及HBV基因表达与复制所需的顺式作用元件。HBV基因组共含有4个转录单元，每个转录单元构成一个独立的开放读码框（Open Reading Frame，ORF），由于4个转录单元之间相互重叠（图1），因此其ORF全长为4.7 Kb。HBV的4个ORF（表1）分别为P，X，C，S，它们编码至少8种蛋白，其中SORF长度为1185 bp，编码含有226个氨基酸的包膜主要表面蛋白，又称小表面蛋白，即HBsAg。S 端的终止密码。C(ORF由S、Pre-S1和Pre-S2三个区域组成，编码的大、中、小HBsAg，各个区都有各自的起始密码ATG，但三个区共用5 ORF的长度为639 bp，编码前C抗原、HBcAg和HBeAg，HBcAg是免疫攻击的靶抗原。X ORF长465 bp，编码155个氨基酸的X蛋白，是参与细胞凋亡的反式激活蛋白。P ORF长2,532 bp，编码844个氨基酸的P蛋白（即DNA多聚酶）是病毒复制的主要功能单位，也是抗病毒药物开发的主要靶标［4］。HBV具有病毒复制产量高（1012-13病毒粒/日）和突变率高（1010-11个点突变/日）的特征［3,5］，高突变是由于高复制，尤其是由于基因组复制，需先转录为RNA中间体，但聚合酶缺乏校正功能所致。长期的这种自发突变导致形成了A-H 8种HBV基因型。 图1.　HBV基因组结构（来源: http://www.virogen.co.kr） Fig.1