远程缺血后处理对局灶性脑缺血大鼠血脑屏障通透性的影响.pdfVIP

· 5l4 · 广东医学 2015年 2月第 36卷第4期 GuangdongMedicalJournal Feb．2015，Vo1．36，No．4 远程缺血后处理对局灶性脑缺血大 鼠血脑屏障 通透性的影响米 梁蓉 ，王政 ，陈烨錾 ，胡静 ，冯璐 ，李帅 ，陈兵 ，胡晓松。 成都医学院 临床医学院，护理学院，形态学实验室(成都610500) 【摘要】 目的 探讨远程缺血后处理(RIP)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的影响及其脑 保护作用机制。方法 采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型(MCAO)，并将大鼠随机分为Sham组、MCAO 组、RIP组。Sham组不进行线栓阻断血流，MCAO组仅造模，RIP组在 MCAO模型再灌注开始时，用橡皮筋扎紧大 鼠双下肢 10min／次，放开 10min，共3次。造模 1、7d后处死大鼠并取材。通过伊文思兰检测血脑屏障通透性，免 疫组化检测MMP一9、TIMP—l的表达情况。结果 与MCAO组比较 ，再灌注1d及 7d，RIP组脑组织伊文思蓝含 量均明显降低 (P0．05)。再灌注 1d，RIP组TIMP一1的阳性细胞数较MCAO组明显增多(P0．05)，而MMP一9 的阳性细胞数则明显减少(P0．05)。再灌注7d，与MCAO组比较 ，RIP组MMP一9、TIMP一1阳性细胞数差异均 无统计学意义(P0．05)。结论 RIP可抑制脑缺血后早期 MMP一9的表达，提高TIMP一1水平，从而减轻血脑 屏障的损害。 【关键词】 脑缺血；远程缺血后处理；血脑屏障；大鼠 缺氧缺血性脑病发病率有逐年提高的趋势，且病 mm处作一小切 口，将直径0．26mill、头端圆钝的鱼线 ， 程周期长，预后差，严重影响患者生活质量。此外 ，临 经颈总动脉分叉部进入颈 内动脉 (19．0±0．5)mm，轻 床的药物治疗及康复训练等费用昂贵而效果不佳 ，给 微遇阻即止。在大鼠脑缺血 1h后 ，拔出鱼线 ，恢复脑 家庭和社会带来巨大经济负担，因此亟需探索新的治 组织供血 (血流再灌注 1d和7d两个时间点处死动 疗策略。远程缺血后处理 (remoteischemicpost—con— 物)。Sham组模型参照大鼠MCAO模型的制作方法 ， ditioning，RIP)是一种全新的干预手段，REN等 证 明 不进行线栓阻断血流。RIP模型的制作则是在 MCAO 其对脑缺血具有保护作用。基质金属蛋白酶 一9(ma． 模型再灌注开始时，立即用橡皮筋扎紧大鼠双下肢 ，造 trixmetalloproteinase9，MMP一9)是基质金属蛋 白酶 成下肢缺血 ，结扎 10rain，放开 10rain，如此循环 3次。 (matrixmetalloproteinase，MMPs)家族中分子量最大的 动物清醒后行Zealonga评分 判定模型成功与否，评 明胶酶，脑缺血时过度表达 ，降解血管基膜 ，破坏血脑 分在 1～2分者纳入实验。 屏障 。金属蛋 白酶抑制剂 (matrixmetalloproteinase 1．3 神经功能评分 所有大 鼠术后采用 GRACIA inhibitor一1，T1MP一1)是MMP一9的抑制剂 ，可特异性 等 评分标准进行神经功能评分。评分范围在3～18 抑制MMP一9的表达起脑保护作用[33。2013年7月至 分之间，分值越大，神经功能损伤越轻，18分者正常。 2014年5月，本研究拟通过建立RIP脑缺血模型，探讨 3人评分，取平均值。 RIP对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性 1．4 血脑屏障通透性的评估 大 鼠取材前 1h，股静 及 MMP一9、TIMP一1的表达的影响，为RIP的临床应 脉注射2％伊文思蓝 (EB，Sigma公司)生理盐水溶液 用积累实验资料 。 (4mL／kg)，1h后左心室灌注生理盐水溶液 ，直至右 1 材料与方法 心房流出无色、透明液体，迅速断头取脑，剥尽软脑膜 ， 1．1 动物与分组 雌性 SD大鼠50只，随机分为假手 电子天平测脑湿重。将脑组织剪碎放入盛有甲酰胺的 术组 (Sham组，2／=1