辐照西洋参培养物皂苷次生代谢调控的研究-核农学报.pdfVIP

核 农 学 报 　2003 ,17 (3) :207～211 207 　 Acta Agriculturae N ucleatae Sinica ( ) 文章编号 2003 0320705 辐照西洋参培养物皂苷次生代谢调控的研究 张美萍 　王 　义 　孙春玉 　李向高 ( 吉林农业大学 　吉林长春 　130118) 摘 　要 :研究了不同前体 、前体浓度 、前体加入时期 、前体作用时间、ATP 浓度 、烟酸浓 度对西洋参芽胞愈伤组织生长及皂苷合成的影响 。结果表明:01 % 甲羟戊酸对生长 有抑制作用 ,对皂苷合成有明显的促进作用 ; 100mgL 亮氨酸对生长无明显影响 ,对 皂苷合成有促进作用 ;444mgL 的醋酸镁对培养物生长和皂苷合成都有促进作用 ;在 继代开始时加入前体皂苷含量最高 ; 甲羟戊酸作用 6h 皂苷产量最高 ;160mgL ATP 对 60 生长和皂苷合成均有促进作用 ; 10mgL 烟酸利于培养物生长和皂苷合成 ;用 Co γ 射线辐照培养物 ,剂量为 4000 Gy 时得到皂苷含量高于原愈伤组织 1 倍的细胞系 。 关键词 :西洋参 ;愈伤组织培养 ;皂苷 ;次生代谢调控 对于那些代谢途径已弄清的次生代谢物 ,在培养基中补加适当的前体物质[ 1] 、中间代谢物 或旁路抑制剂[2 ] ,对 目的次生代谢产物产量的提高是有效的 ,可较大地提高次生代谢物的产 量 。然而 ,补加直接前体对终产物的增加并不一定起作用 ,寻找最有效的前体并不简单 ,而且 前体的加入方式对获得满意的结果是很关键的 ,特别是对于那些具有毒性和不稳定性的化合 物 。西洋参皂苷合成途径不十分清楚 ,本实验试图通过饲喂前体 、辅酶 、ATP 并结合辐照处理 来提高西洋参皂苷产量 ,间接证明皂苷的合成途径 ,为定向化生产单体皂苷提供依据 。 1 　材料和方法 采用本实验室筛选的西洋参芽胞愈伤组织无性系作为实验材料 。西洋参芽胞愈伤组织悬 浮培养物添加不同前体 、ATP 和烟酸 ,测定培养物生长量和皂苷含量 。 60 γ Co 辐照在长春高新辐射中心进行 ,愈伤组织继代培养 10d 后进行 ,辐照剂量分别为 0 ( ) CK 、1000 、2000 、3000 、4000 Gy ,剂量率为 90 Gy/ min 。辐照后继续培养 15d ,测定生长量和皂苷 ( ) 含量 ;辐照处理后继代 5 次 ,用 HPLC 测定皂苷含量 。以鲜重及干重 g/ 瓶 作生长指标测定细 胞生长量 ,具体方法见文献[3 ] 。培养物中皂苷含量测定方法如下 :将培养物于 60 ℃烘干 ,研 [4 ] ( ) 碎 ,精称 1g ,用 甲醇回流提取 , 具体方法见文献 。紫外分光光度分析 DU7500 方法见文 献[3 ] 。高效液相色谱柱选用 Zobarx C 柱 ,流动相采用乙腈和水梯度洗脱 ,流速 15mlmin ,柱温 8 收稿 日期 ( ) 基金项 目: 国家科技部科技型企业技术创新基金资助项 目 00C26N2210138 ( ) 作者简介 :张美萍