BCGHPV16E7c疫苗对小鼠免疫效应的实验研究.docVIP

　　BCGHPV16E7c疫苗对小鼠免疫效应的实验研究 ：黄斌，雷蕾，程晨，吴少庭，吴瑞芳 【摘要】 目的 研究卡介苗(BCG)人乳头状瘤病毒16型 (HPV16) E7c疫苗对小鼠的免疫效应和致病性。方法 用本研究组制备的BCGHPV 16E7c疫苗腹腔内接种清洁级BALB/c鼠, 同时设磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、BCG空白菌对照组及BCGpBCG 3000空白载体对照组，用酶联免疫法检测各组血清特异性抗体、流式细胞仪测定脾脏T淋巴细胞亚群及肝、肺组织病 理学 检查。结果 免疫后第2周和第4周BCGHPV16E7c组每只小鼠的血清中检测到抗HPV16E7c特异性抗体，在第4周诱导产生的特异性IgG抗体滴度明显高于第2周，平均滴度为1∶200;免疫后第4周BCGE7c组与各对照组比较,CD8+T细胞的百分率显著升高(Plt;0.05);免疫组小鼠肝、肺组织病理学检查和BCG对照组比较未观察到更为严重的病理学变化。结论 本研究组构建的BCGHPV16E7c疫苗能诱导小鼠的体液免疫应答和细胞免疫应答，对小鼠无明显的毒性作用。 【关键词】 宫颈癌;疫苗;人乳头状瘤病毒16型;免疫效应 Immunological effect of BCGHPV16E7c vaccine in miceHUANG Bin1,LEI Lei2,CHENG Chen1,ethods The SPF BALB/c mice received intraperitoneal inoculation of selfmade BCGHPV16E7c vaccine, phosphate buffered saline (PBS), BCG and BCGpBCG 3000, respectively. Serum specific antibody, splenic T lymphocyte subsets, and hepatic and pulmonary pathology ined in 4 groups. Results Serum specific antibody against HPV16E7c arkably (average, 1∶200) in the 4th oral and cellular immune response in mice, and has little toxicity. 　　Key an papillomavirous type16; immunological effect 　　宫颈癌是发生在全球妇女中第二大常见的恶性肿瘤[1]，其病死率已跃升各类妇科肿瘤之首[23]。全球每年新发例约50万，死亡例数约 25万, 我国每年有12万的新发病例，且每年约有2万妇女死于宫颈癌[4]。而人乳头瘤病毒(HPV)与宫颈癌之间有较为明确的病因学联系, HPV感染是宫颈上皮内瘤(CIN)形成以及宫颈癌发生的主要危险因子, 其中HPV16型最为常见。因此，研究HPV疫苗对防治宫颈癌有重大意义。本研究组已成功构建BCGHPV16E7c疫苗, 现就该疫苗对小鼠的免疫效应报道如下。 　 　1 材料和方法 　　1.1 动物及疫苗 　　BCGHPV16E7c疫苗、pETE7C重组蛋白、BCGpBCG3000空白载体为本课题组制备。清洁级BALB/c小鼠，6～8周龄，购于广东中医药大学实验动物中心。 　　1.2 主要试剂 　　Pet23a表达载体质粒购于Invitrogen公司,BCG上海株购于成都生物制品研究所，EZSepTMMouse1淋巴细胞分离液、LymphoSpotTM无血清培养基购于深圳达科为公司，CD3eFITC CD4PE、CD8aPE单抗购于eBioscience公司。 　　1.3 试验小鼠的分组和免疫接种 　　清洁级BALB/c、6-8周龄雌性小鼠32只，随机分4组,每组8只小鼠：PBS(磷酸盐缓冲液)对照组、BCG空白菌对照组、BCGpBCG3000空白载体对照组、BCGE7c免疫组，于0周时，分别以PBS溶液100 μL及107CFU/mL的各BCG 100μL腹腔内接种各鼠。 　　1.4 血清特异性抗体的检测 　　分别于第2、4周从各实验组取鼠4只，检测血清特异性抗体。摘小鼠眼球采血，分离血清，将抗原(pETE7C重组蛋白)包被于聚苯乙烯96孔反应板(10 μg/孔)，4℃过夜，PBST(含0.01%吐温-20的PBS溶液)洗涤;每孔加入200μL含1%BSA(牛血清白蛋白)的PBST封闭，4℃过夜;以小鼠免疫血清为一抗，每孔加入用封闭液对倍稀释的免疫血清100 μL，37℃ 1h, 洗涤;以封闭液(1∶5000)稀释的抗鼠IgG为二抗，每孔加入100