131I1H12的制备及对非小细胞肺癌细胞A549的结合及生物学效应研究.docVIP

　　131I1H12的制备及对非小细胞肺癌细胞A549的结合及生物学效应研究 ：殷宁，杜明华，钟英，曲海船 【摘要】 目的: 研究放射性核素碘(131I)标记表皮生长因子受体单克隆抗体(McAb)1H12的实验条件，观察标记产物131I1H12与人肺癌细胞A549的免疫结合及生物学效应。方法:131I以 Iodogen法标记1H12，经体外细胞结合试验分析检测标记抗体的免疫活性;通过流式细胞仪检测不同剂量131I1H12(148、74、37 kBq)、游离131I(148 kBq)及1H12(80 nmol·ml-1)对A549细胞的作用。结果:131I1H12标记率为50.14%，比活度为4.63 MBq·μg-1,放射性浓度为77.31 MBq·ml-1，放射性化学纯度为96.92%。131I1H12与A549细胞结合率为61.12%;131I1H12诱导A549细胞凋亡和周期阻滞呈剂量效应关系，以148 kBq131I1H12作用效应最大，凋亡率达到(44.35±3.31)%，G2/M期细胞阻滞率达(51.17±2.98)%。结论:131I1H12能够与A549细胞发生免疫结合，并调控细胞周期和诱导细胞凋亡。 【关键词】 非小细胞肺癌; 表皮生长因子; 放射免疫 治疗 ; 131I; 单克隆抗体 　　[Abstract] Objective: To investigate the experimental conditions of radionuclide iodine(131I) labeling epidermal groonoclonal antibody(McAb) 1H12, observe the cellbinding function and biological effects of 131I1H12 to human lung cancer cells A549. Methods: 1H12 ethod. The immunopetence of 131I1H12 etry assay ol·ml-1)and equivalent medium. Results: The labeling rate of 131I1H12 ical purity l-1 and 96.92% respectively. The specific binding rate of 131I1H12 to A549 cells e apoptosis rate[(44.35±3.31)%] and G2/M cell cycle blockage rate[(51.17±2.98)%] munobind ight have some potential application prospect in biological targeted diagnosis and therapeutics. 　　[Key all cell lung cancer; epidermal gromunotherapy; 131I; monoclonal antibody 　　表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌的治疗中已成为一个重要的靶点，目前针对EGFR的肺癌靶向治疗药物(易瑞沙、特洛凯等)早已进入临床应用[1-2]。为研究应用抗EGFR抗体进行非小细胞肺癌放射免疫显像及治疗的可能性，本实验通过放射性碘标记EGFR单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)1H12，探讨了131I1H12与人肺癌细胞A549在体外结合情况及其生物学效应。 　 　1 材料与方法 　　1.1 A549细胞 　　人非小细胞肺癌A549细胞系22代，购于 中国 科学 院上海细胞生物研究所。 　　1.2 主要仪器 　　FH463A自动定标器(西安二六二厂核仪器分厂);RM905a活度计(中国计量科学研究所); HERA Cell CO2培养箱(美国Kendro公司);Eppendorf cenhifuge低温冷冻离心机(德国Eppendorf公司);YJ875超净工作台(苏州苏净净化设备有限公司);流式细胞仪：FACS Vantage SE型。 　　1.3 主要试剂 　　鼠抗人EGFR McAb(1H12)：美国CST公司产品，纯度gt;98%。Na131I溶液:中国核动设计院第一研究所(无还原剂、无载体)产品。Iodogen(四氯二苯基甘脲)：美国Sigma公司产品。葡聚糖凝胶G50(SephadexG50):瑞典 Amersham Biosciences公司产品。细胞培养液RPMI 1640培养液: Gibcobrl公司产品。胎牛血清(FCS):杭州四季青生物工程材料有限公司产品