头孢西丁耐药的葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析.doc

　　头孢西丁耐药的葡萄球菌mecA基因检测及耐药性分析 ：陈颖，宋明胜，周建党，徐令清，伍勇 【摘要】 　　目的 对头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的可靠性进行评价，并分析头孢西丁耐药的葡萄球菌即MRS感染及耐药性情况，以指导临床合理用药。方法 临床分离葡萄球菌310株，以PCR检测葡萄球菌mecＡ基因为判断MRS的标准，按美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)标准操作规程进行头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法(KB法)药敏试验检测MRS，同时检测MRS及甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)对10种常用抗生素的耐药性。结果 在310株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌198株，凝固酶阴性葡萄球菌112株，经mecＡ基因检测，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198)，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRS)为62.5%(70/112)；头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%，检测MRS敏感性为98.6%，特异性为100%；除复方新诺明和万古霉素外，MRS对其余8种抗生素的耐药率明显高于MSS，差异具有统计学意义(Plt;0.01)。结论 头孢西丁纸片扩散法操作简便，结果可靠，可作为临床实验室检测MRS的常规方法；MRS的感染发生率及耐药性较高，且对各类抗生素多重耐药，需加强其耐药性监测。 【关键词】 头孢西丁；葡萄球菌；耐药性分析；mecA基因 　　葡萄球菌是引起 医院 感染的常见病原菌，其中耐甲氧西林葡萄球菌(methicillinresistant staphylococcus, MRS)有逐渐上升的趋势，并具有多重耐药性，所造成的医院感染一直是临床普遍关注的问题。为及时准确地掌握MRS的感染率及耐药率，我们采用PCR方法检测葡萄球菌mecA基因为判断MRS的标准，按照美国国家临床实验室标准化研究所(CLSI/NCCLS)标准操作规程进行头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法(KB法)药敏试验检测了310株葡萄球菌，同时检测了其对10种常用抗生素的耐药性，并且进行了统计分析，现将结果报告如下。 　 　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 菌株 　　我院2006年1月至2006年6月临床分离葡萄球菌310株，其中金黄色葡萄球菌198株、表皮葡萄球菌47株、腐生葡萄球菌36株、溶血葡萄球菌29株，标准菌株为湖南省临检中心提供的金黄色葡萄球菌ATCC25923。 　　1.1.2 试剂 　　苯唑西林(OX)、头孢西丁(FOX)、头孢唑啉(CZO)、氨苄西林(AMP)、红霉素(ERY)、克林霉素(CLI)、万古霉素(VA)、复方新诺明(SXT)、阿米卡星(AMK)、利福平(RA)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LVX)纸片以及药敏培养基(MH琼脂)均购自OXOID公司；PCR扩增所需试剂均为上海生工工程公司产品，上游引物P1：5′TGGCTATCGTGTCACAATCG3′，下游引物P2：5′CTGGAACTTGTTGAGCAGAG3′，扩增片段为310bp。 　　1.1.3 仪器 　　BioRad icycler荧光定量PCR系统。 　　1.2 方法 　　1.2.1 纸片扩散法 　　按CLSI/NCCLS标准操作规程进行，检测各菌株对每种药敏纸片的敏感性，以ATCC25923为标准质控菌株，药敏结果依据CLSI/NCCLS(2006年)判断。 　　1.2.2 mecA基因检测(PCR) 　　①模板的制备：将液体培养基中适量的指数生长期细菌(最多可达1×109CFU/mL)，离心后彻底弃净上清液，用上海生工细菌基因组DNA抽提试剂盒提取DNA作为PCR的模板。②反应体系：总体积25μL，其中含10×PCR buffer 2.5μL、25mmol/L Mg2+ 2.5μL、10mmol/L dNTP 0.5μL、Taq DNA酶2.5u、25pmol/L的引物1和引物2各1μL、DNA模板5μL、无菌双蒸水12μL。③反应条件：94℃ 5min预变性，94℃ 30s，57℃ 30s，72℃ 100s循环30次，72℃延伸5min。扩增时以ATCC25923作为阴性对照。④结果判断：5μL PCR产物点入含EB的20g/L琼脂糖凝胶，0.5×TBE为电泳缓冲液，用水平式电泳槽稳压100V，电泳4min，凝胶成像系统观察结果、成像。 　　1.2.3 统计学处理 　　采用WHO5软件统计葡萄球菌对10种抗生素的耐药率，比较采用SPSS13.0软件进行χ2检验，以Plt;0.01为差异具有统计学意义。 　　198株金黄色葡萄球菌mecＡ基因阳性为113株；苯唑西林纸片扩散法阳性112株，阳性检出率为99.1%(112/113) ，假阴性率为0.88%(1/