幽门螺杆菌iceA1，babA2基因型与临床消化疾病的关系.doc

　　幽门螺杆菌iceA1，babA2基因型与临床消化疾病的关系 【摘要】 目的： 研究镇江地区幽门螺杆菌（H.Pylori）iceA1, babA2基因型分布及其与临床消化疾病的关系。方法： 从70例胃十二指肠疾病患者胃黏膜活检组织中分离培养H.Pylori，PCR扩增检测H.Pylori iceA1, babA2基因型。用χ2检验分析各基因在不同胃十二指肠疾病中的统计学意义。 结果： 70例菌株的总检出率分别为iceA1 68.6%，babA2 65.7%。其中iceA1的分布为胃癌12/14(85.7％)，慢性胃炎18/30(60%），消化性溃疡18/26(69.2%)；而babA2的检出率为胃癌8/14(66.7%），慢性胃炎19/30(63.3%)，消化性溃疡19/26(73.1%）。 结论： 镇江地区分离的H.Pylori的iceA1与babA2基因与胃癌、消化性溃疡、慢性胃炎等疾病类型的发生无显著相关性，但iceA1在胃癌中的检出率高于慢性胃炎与消化性溃疡患者。 【关键词】 幽门螺杆菌； iceA1基因； babA2基因； 上消化道疾病 ［Abstract］ Objective: To investigate the distribution of iceA1 and babA2 genes of Helicobacter pyloric(H.Pylori) in Zhenjiang area and the relationship bet the patients erase Chain Reaction(PCR). The results a patients, in 18/30(60%) of peptic ulcer patients, in 18/26(69.2%) of chronic gastritis patients. babA2 a patients, in 19/30(63.3%) of peptic ulcer patients, in 19/26(73.1%) of chronic gastritis patients. Conclusion： No association of different clinical diseases gastric carcinoma patients 以内）活检组织，每例取新鲜胃黏膜3块，其中1块置于输送液中用于H.Pylori 分离培养与胃黏膜DNA提取，1块用于快速尿素酶检测，1块用于病理组织学检查。70例中慢性胃炎30例，消化性溃疡26例，胃癌14例。疾病的诊断依据胃镜和病 理学 检查。 1.2 H.Pylori的培养与鉴定 自输送液中取出胃黏膜标本，以接种环轻轻将组织置于固体培养基上（4%基础培养基加无菌全羊血及选择性抗生素）反复涂抹后，于37 ℃微氧条件下培养3～5 d，经菌落形态、涂片染色显微镜下观察以及生化反应（尿素酶，氧化酶和触酶）证实。 1.3 基因组DNA提取 按标准PBS/氯仿，异戊醇法抽提基因组DNA［3］。 1.4 引物设计 以已知iceA1基因（登录号AF 459446.1）及babA2基因（登录号AF 033654.1）分别设计引物，引物序列和扩增片段长度见表1。引物均由上海生物工程公司合成。 1.5 PCR反应 PCR总体积均为20 μl。dNTP和Taq聚合酶购自TakaRa宝生物工程（大连）有限公司。反应体系如下：10×PCR 缓冲液 2.0 μl，Taq酶0.3 μl，P1 引物 0.5 μl，P2 引物 0.5 μl，cDNA 1 μl，dNTP 2.0 μl，ddH2O 14.7 μl。iceA1扩增条件：94 ℃预变性5 min，94 ℃ 30 s，53.7 ℃ 20 s，72 ℃ 30 s，35个循环；最后72 ℃延伸10 min。babA2扩增条件：94 ℃预变性5 min，94 ℃ 30 s，57.7℃ 40 s，72 ℃ 45s，35个循环；最后72 ℃延伸10 min。反应在BroRad公司的MyCyer PCR仪上进行，以1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。PCR产物送上海英骏生物技术工程有限公司测序，测序结果与PubMed 上公布的H.Pylori序列进行对比分析。表1 iceA1和babA2基因的PCR引物 1.6 统计学分析 SPSS13.0统计软件进行χ2检验。 2 结 果 2.1 扩增结果 iceA1和babA2获得目的大小的PCR产物（图1和图2）。 2.2 iceA1及babA2基因的检出率 镇江地区iceA1, babA2基因型检测结果显示，70株H.Pylori中iceA1总阳性率为68.6％，babA2总阳性率为65.7％。iceA1