恶性血液病自体造血干细胞移植后DCCIK细胞预防复发探讨.doc

　　恶性血液病自体造血干细胞移植后DCCIK细胞预防复发探讨 ：王玲 史春雷 李颖 袁成录 【摘要】 目的 探讨恶性血液病自体造血干细胞移植后应用树突状细胞细胞因子诱导的杀伤细胞（DCCIK）预防复发的效果。方法 12例恶性血液病病人自体造血干细胞移植后静脉输注及腹股沟注射DCCIK 细胞2～3次，观察疾病的复发情况以及DCCIK 细胞输注后的副作用。结果 7例持续完全缓解（CR），中位CR期44（32～56）月。4例死亡，其中3例复发。结论 DCCIK细胞治疗可能有助于清除微小残留病，预防疾病复发，延长病人生存期，且副作用小，临床可以选用DCCIK细胞预防自体造血干细胞移植后恶性血液病的复发。 【关键词】 DCCIK细胞；造血干细胞移植；移植，自体；复发 　　［ABSTRACT］ Objective To observe the clinical efficacy of dendritic cells in bination alignant hematopathy after autohematopoietic stem cell transplantation (AutoHSCT).Methods After autoHSCT, 12 patients alignant hematopathy ally for 2-3 times a ission (CR) edian CR period onths, four died, in ent ay be helpful in clearing minimal residual disease, preventing relapse and prolonging the patients’ life alignant hematopathy after autoHSCT. ［KEY CSF 150 μg皮下注射，每天1次，连续注射1～3 d，然后再进行细胞采集。 　　1.2.2 细胞采集 　　使用细胞分离单采机（SPECTRA 6.0，COBE公司，美国）采集病人外周静脉血6～8 L，每120～150 mL血浆约采集(3～6)×109单个核细胞。 　　1.2.3 抗原制备方法 　　根据肿瘤类型选择相同病理类型的人肿瘤细胞株制备抗原，细胞株均购自中国科学院上海生物科学院细胞资源中心。将肿瘤细胞株培养至(1～2)×108个，收集细胞，生理盐水洗涤。将细胞置于RPMI 1640培养液中反复冻融，离心去残渣，上清液过滤备用。 　　1.2.4 DC和CIK细胞制备 　　采集的细胞按照常规方法分离并洗涤单个核细胞，调整细胞的密度至1×1010/L，平均加到16只细胞培养瓶（美国BD公司）中，于37 ℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育2 h，使贴壁细胞和悬浮细胞分离。取出悬浮细胞置另外细胞培养瓶中备用。在含有大量贴壁细胞的培养瓶中加入含有20 μg/L IL4、50 μg/L GMCSF的DC无血清培养基（德国CellGenix公司），在37 ℃体积分数0.05的CO2培养箱中孵育，6 d后加入DC培养液和相应的肿瘤抗原继续培养2 d，即为成熟DC，部分回输，其余冻存。悬浮细胞的培养瓶中加入适量RPMI 1640培养液、灭活胎牛血清和IL2、 IFNα、CD3单抗（美国RD公司）细胞因子等，在37 ℃体积分数0.05的CO2条件下培养。第8天细胞部分静脉回输，余细胞继续培养至15 d。 　　1.2.5 细胞表型检测和细胞计数 　　培养结束后，采用流式细胞仪检测DC标志DR和CD83，以CD3为标志来鉴定检测CIK细胞；回输前分别计数DC和CIK细胞。 　　1.3 治疗方法 自体造血干细胞移植造血恢复后1个月开始回输DC。回输前将DC均分，1份与CIK混合制成250 mL细胞悬液（内含1 500 U/mL 的IL2，体积分数0.01的清蛋白），经静脉回输；1份制成1.5 mL细胞生理盐水悬液，皮下注射到肿瘤邻近的淋巴结区。上述治疗每周进行1次，共3次。疗程结束后1个月随访观察疗效。观察治疗前后血清干扰素γ（INFγ）、白介素10（IL10）和白介素12（IL12）含量变化等。 　　1.4 统计学方法 采用SPSS 10.0及PPMS 1.5[1]统计软件进行统计处理。 　　2 结 果 　　2.1 细胞表型检测和细胞计数 DC标志 DR和CD83的表达率分别为75%～84%和76%～85%，CIK CD3的表达率为88%～95%。每个疗程细胞总量：DC为(188.3±79.8)×106个，CIK为(58.8±22.3)×108个。 　　2.2 病人免疫指标观察 治疗前病人血清INFγ、I