温州地方株HPV16型L1基因多态性及蛋白特性分析.doc

　　温州地方株HPV16型L1基因多态性及蛋白特性分析 ：陈俊，董海艳，朱珊丽，欧琴，张丽芳 【摘要】 目的 ：了解温州地方株HPV16 L1基因结构特点，分析其结构蛋白L1基因多态性及蛋白特性变化，为基于L1基因工程疫苗的设计和应用提供理论依据。方法：设计HPV16型L1基因特异性引物，从宫颈癌组织标本提取DNA，进行PCR扩增鉴定，PCR产物直接测序；进一步用Vector NTI 8.0和DNAStar软件分析HPV16型L1基因多态性及蛋白特性变化情况。结果：测定的序列与标准基因序列(NC 001526)比较，温州地区宫颈癌感染的HPV16型L1基因同源性为99.1%～99.8%，分别形成8种突变模式，其中3处由于核苷酸的改变，翻译的氨基酸也相应发生变化，但其编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性上与标准株相比较无明显变化。结论：温州地方株HPV16 L1核酸有一定程度的变异。 【关键词】 人乳头瘤病毒；宫颈癌；L1基因；突变；基因多态性 　　Abstract: Objective: To study the character of HPV L1 gene from ethods: The tissue DNA cervical carcinoma. The L1 gene of HPV plified ers， respectively. And L1 PCR products orphism and protein property ology utations utations produced protein variations because of amino acids changed， but differences of their proteins e mutation had taken place in the nucleotide sequence of L 1 gene of HPV 16 obtained from the cervical carcinoma tissues in avirus；cervical carcinoma；L1 gene；mutation；gene polymor-phism 　　人乳头瘤病毒（HPV）16型是高危型HPV之一，与宫颈癌的发生有关[1]，约50%的宫颈癌患者肿瘤组织的DNA中检测到该型别[2]，因此，预防HPV感染对防治宫颈癌有重大意义。但HPV16在与不同遗传背景的宿主相互作用往往会引起病毒的变异，影响HPV感染和转归，了解HPV16多态性将为明确宫颈癌的发生和运用免疫学策略预防HPV16相关疾病提供新的思路。为了解温州地区宫颈癌患者HPV16 L1基因结构特点和变异 规律 ，我们从宫颈癌组织DNA中扩增L1 基因片段，并进行克隆和测序分析，为疫苗研制奠定基础。 　 　1 材料和方法 　　1.1 标本 　　11份宫颈癌组织标本于温州医学院附属第二 医院 妇产科就诊的患者， 均经临床和病理诊断确诊为宫颈癌。每份标本均无菌切取病变组织(约2 cm×2 cm)，-80 ℃保存备用。 　　1.2 主要试剂 　　PCR试剂、λDNA/Hind III DNA marker购于上海晶美生物工程有限公司，动物组织DNA提取浓缩试剂盒购于大连TaKaRa公司，PCR清洁试剂盒购于杭州维特洁生化技术有限公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 标本DNA的提取及PCR引物的设计：按试剂盒说明书操作提取宫颈癌组织标本DNA。以GENEBANK中报道的HPV16(收录号为NC 001526 )L1基因序列为标准序列，共设计4条引物(见表1)，分别用于PCR扩增L1完整开放读码框和基因序列测定。由北京三博生物技术有限公司合成。 　　1.3.2 HPV L1基因扩增及型别鉴定：以标本DNA为模板，用HPV16型特异性引物行PCR扩增。扩增参数为：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，30个循环；72 ℃ 10 min。PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定。 　　1.3.3 HPV L1基因序列测定及蛋白特性分析：PCR产物经PCR清洁试剂盒纯化，由杭州华大基因研究中心用特异性引物进行L1基因全长序列测定。与GENEBANK中的HPV16序列(NC 001526)进行比较，用Vector NTI 8.0和DNAStar软件对测序结果进行序列分析。 　 　2 结果 　　2.1 HPV16型特异性引物PCR扩增检测结果 　　PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果如图1所示，可见一约1 600 bp的扩增条带。11份标本中HPV16 L1型DNA阳性率为54.5%(6/11)。 　　2.2 HPV16 L1基因全长序列测定及同