HPLC同时测定苯巴比妥卡马西平苯妥英安定血药浓度.docVIP

HPLC 同时测定苯巴比妥、卡马西平、苯妥英、安定血药浓度 天津儿童医院儿研所 李惠芬 内容摘要 目的：应用高效液相色谱法同时测定抗癫痫“中药”中苯巴比妥、卡马西平、苯妥英、安定血药浓度，以指导临床安全、有效、合理用药。方法：应用高效液相色谱法，采用Symmtry C18色谱柱，磷酸盐缓冲液与乙晴64:36(v/v)为流动相，紫外检测波长 214 nm。微量血中，乙腈沉淀蛋白，上清液进样分析。结果：苯巴比妥、卡马西平、苯妥英、安定色谱分离理想，分别在5.0～50.0、1.0～12.0、5.0～25.0、0.10～2.00 mg/L范围内线性关系良好，日内和日间精密度5%，平均相对回收率为98.65% ～102.64%。结论：本方法简便、快速、精密、准确，用血量少，适用于临床治疗药物监测，为临床用药的合理、有效、安全提供保证。 关键词 HPLC、苯巴比妥、卡马西平、苯妥英、安定、血药浓度 　 目前，我国约有癫痫患者600万，每年新发病例65万～70万[1]。癫痫主要采取药物治疗，很多患者及其家属认为中药毒副作用小而更愿意选用中药进行治疗。然而，治疗癫痫的一些中药制剂中常常含有西药成分，患者服用后，有些产生西药的不良反应，且给其他临床医生添加西药带来不便。因此，所谓纯中药进行治疗的患者，往往需检测血液中一种或多种西药的药物浓度，方便临床进一步治疗。目前最常用的检测方法为高效液相色谱法。一般来说，在临床药学实验室中通常只配备一台高效液相色谱仪，在测定其血药浓度时，各个方法间的切换费时、费力，直接影响到危重病人的抢救和对病人用药的指导，并且增添了不少工作量。为此，建立同一条件下，测定苯巴比妥、卡马西平、苯妥英、安定血药浓度的方法，为临床提供简便、快速、准确的定性、定量结果。 1 材料与方法 1.1 材料 （1）仪器: 美国Waters公司高效液相色谱仪，配备600E型泵，486 型可变波长检测器，pc-800工作站。（2）药品和试剂: 苯巴比妥、卡马西平、苯妥英和安定对照品（中国药品生物制品检定所），5-羟基5-乙基巴比妥酸（美国Sigma公司），乙腈、甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯试剂， 1.2 方法：（1）色谱条件： 色谱柱: Symmtry C18钢柱（4.6 mm×150 mm , 5 um）；流动相：磷酸盐缓冲液(pH 6.9)与乙晴体积比为 64:36；流速: 1.2 ml/min，紫外检测波长: 214 nm。柱温：室温，进样量：10μl。（2）血清样品处理： 取标准或待测血清50 μl，加入80 μl含内标物5-羟基5-乙基巴比妥酸10 mg/L的乙腈液，沉淀蛋白，静置，10000 r/min离心5 min，取上清液10 μl进样。按内标法计算标本含量。（3）标准溶液的配制： 精密称取苯巴比妥、卡马西平、苯妥英和安定对照品50，25，50，10 mg，用甲醇分别定容为1.0，0.5，1.0，0.2 g/L的标准溶液，4oC保存。（4）标准样品配制：取空白血清加入苯巴比妥、卡马西平、苯妥英和安定标准溶液，配制苯巴比妥5.0，10.0，20.0，30.0，40.0，50.0 mg/L；卡马西平1.0，2.0，4.0，8.0，12.0mg/L；苯妥英5.0，10.0，15.0，20.0，25.0 mg/L；安定0.10，0.25，0.50，1.00，2.00mg/L 系列浓度的标准血清样品，按上法操作，以对照品与内标物的峰高比为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X），进行线性回归。以标准样品的测定考核方法的精密度和回收率。 1.3 统计学方法 计量资料数据均用 ±S表示， 进行直线回归与相关分析。 2 结果 2.1 色谱图 在上述色谱条件下，苯巴比妥、卡马西平、苯妥英、安定和内标物色谱峰分离效果好 ，保留时间分别为2.98，4.82，5.68，17.63，4.21 min。 血清中内源性物质对测定无影响, 见图1。 P1D1: 苯巴比妥 P3D1: 卡马西平 P4D1: 苯妥英 P7D1: 安定 P2D1: 内标物 P5D1、P6D1:血清内物质峰 图1 血清苯巴比妥、卡马西平、苯妥英、安定色谱图 2.2 标准曲线及检测限 血清苯巴比妥、卡马西平和苯妥英分别在5.0～50.0 、1.0～12.0 、5.0～25.0 和0.10～2.00 mg/L 浓度范围内线性关系良好，回归方程分别为苯巴比妥 Y=0.04936X+0.009753，r=0.9997 ；卡马西平 Y=0.08198X-0.0007091，r=0.9997 ；苯妥英 Y=0.04086X-0.001901，r=0.9996 ；安定Y=0.07092X+0.0009930，r=0.9994。线性关系良好。血清苯巴比妥、卡