Luciferase2%2fmKate2双报告基因对小鼠骨髓间充质干细胞的标记及活体光学成像研究.pdfVIP

第 35卷 第 3期 中山大学学报 (医学科学版) Vol-35 No．3 2014年 5月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Mav． 2014 Luciferase2／mKate2双报告基因对小鼠骨髓问充质干细胞的 标记及活体光学成像研究 刘静静 ，胡晓俊，李征然 ，李 丹，颜荣华，覃 杰，王 劲，单 鸿 (中山大学附属第三医院放射科分子影像学实验室／／中山大学介入放射学研究所 ，广东 广州510630) 摘 要： 【目的】Luciferase2／mKate2双报告基因标记小鼠骨髓间充质干细胞 (mMSC)，并进行活体生物发光和荧光 双模态光学成像研究。 【方法】全骨髓细胞贴壁分离法提取mMSC，进行细胞表面标志物和多向分化潜能的鉴定；CMV— Luciferase2一mKate2慢病毒感染 mMSC，根据细胞 内远红荧光蛋白mKate2的表达水平评估转染效率并利用流式细胞仪进 行纯化筛选；对筛选后的mMSC(mMSC—CMV—Luc2一mKate2，mKate295％)进行活体生物发光和荧光双模态光学成像 。 【结果】成功分离mMSC；表型分析结果显示mMSC高表达 Sca一1(94．5％)、CD44(99．6％)，低表达 CD1lb(0．092％)、CD45 (0．11％)；mMSC具有成脂和成骨分化能力。CMV—Luciferase2一mKate2慢病毒感染mMSC96h后 ，细胞内mKate2的荧光表达 率为22．97％，经流式细胞仪筛选后mKate2表达率大于95％。对筛选后的mMSC进行活体生物发光成像和荧光成像可探测 光信号，光信号强度与细胞数量呈明显线性正相关(生物发光成像为Rz=0．9893；荧光成像为R=0．9226)。 【结论】CMV— Luciferase2一mKate2慢病毒转染mMSC可稳定表达双报告基 因Luciferase2和mKate2，体外可根据细胞 内mKate2的表达水平 间接评估转染效率、进行细胞筛选，活体内可同时进行生物发光成像和荧光成像 ．为 mMSC体内移植后生物学行为的研究提 供了良好、无创的定量示踪手段。 关键词：骨髓间充质干细胞；示踪 ；生物发光成像 ；荧光成像 中图分类号：R237 文献标志码：A 文章编号：1672—3554(2014)03—0334—06 BioluminescenceImagingandFluorescenceImagingonMurineBM -MSCsLabeledwith DualOpticalReporterGeneofLuciferase2／mKate2 LIUJing-jing，HUXiao-jun，LIZheng—ran，LIDan，YANRong-hua，QINJie，WANGJin，SHANHong (LaboratoryofMolecularImaging，DepartmentofRadiology，TheThirdAffiliatedHospital；InterventionalRadioloyg Institute，Sun rat—senUniversity，Guangzhou510630，China) Abstract： 【Objective】Tolabelmurinebonemarrow—derivedmesenchymalstemcells (mMSC)withLuciferase2／mKate2 reportergenesandtrackmMSCthroughbothbioluminescentimaging(BLI)andfluorescenceimaging．M【ethods】ThemMSCwere isolatedandpropagatedbyanadhesivescreeningmethod． CellcharacteristicsandmultilineagedifferentiationcapacityofmMSCwere performed in vitro． mMSC were transfected with