Mas通路在奥美沙坦酯对高糖环境大鼠主动脉平滑肌细胞效应中的作用.pdfVIP

· 2242 · 广东医学 2016年 8月第 37卷第 15期 GuangdongMedicalJournal Aug．2016，Vo1．37，No．15 ACE2／Ang(1—7)／Mas通路在奥美沙坦酯对高糖 环境大鼠主动脉平滑肌细胞效应中的作用木 姚浩，熊龙根，黄姿，钟俊彦，卢子煜 广州医科大学附属第二医院心血管内科(广州510260) 【摘要】 目的 研究奥美沙坦酯对高糖环境大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移的影响，并探 讨ACE2／Ang(1—7)／Mas通路在该效应 中的作用。方法 离体培养大鼠原代胸主动脉 VSMCs，分为正常糖组 (NG组)、甘露醇对照组(Man组)、高糖组 (HG组)、奥美沙坦酯组 (Olm组)、A779组共 5组处理细胞。NG组： 5．5mmo~LD一葡萄糖；Man组：5．5mmo~LD一葡萄糖培养基 中补充 19．5mmo~L甘露醇；HG组：5．5mmo~L D一葡萄糖培养基补充 19．5mmo~LD一葡萄糖；Olm组：HG组培养基 中加入 l×10 mmo~L奥美沙坦酯；A779 组：1×10 mmo~LA779预处理细胞30rain后 ，HG组培养基 中加入 1X10I4mmo~L奥美沙坦酯和 1×10。 mmo~LA779。MTI法检测不同处理因素下细胞的增殖情况，流式细胞术检测细胞周期改变，划痕实验观察细胞 迁移情况，Westernblot法检测ACE2、Mas表达。结果 与NG组相比，HG组表现出高增殖、高迁移，Man组与NG 组差异无统计学意义。Olm组可改善高糖所致病理改变，A779预处理后奥美沙坦酯的治疗作用减弱。Western blot显示高糖环境下VSMCs中ACE2、Mas表达均下调，而Olm组可上调ACE2Mas的表达。结论 奥美沙坦酯可 抑制高糖环境VSMCs的增殖、迁移，该效应可能通过调节ACE2／Ang(1—7)／Mas通路来实现。 【关键词】 血管平滑肌细胞；高糖；奥美沙坦酯；ACE2／Ang(1—7)／Mas通路 高血糖和胰岛素抵抗是动脉粥样硬化及其并发症 方医科大学动物中心提供。 发生、发展 的重要 因素之一…。血管平滑肌细胞 1．2 主要材料与试剂 奥美沙坦酯 (olmesa~an)由Fj (VSMCs)是动脉中膜主要构成成分，其增殖和迁移参 本第一三共制药有限公司上海工厂赠送；DMEM培养 与动脉粥样硬化 的病变过程。肾素 一血管紧张素 基 (低糖型)、胰蛋 白酶、双抗均购 自美国Gibco公司； (RAS)系统激活，尤其是血管紧张素 Ⅱ(AngⅡ)表达 胎牛血清购 自以色列BI公司；PBS粉末购 白武汉博士 增加是动脉粥样硬化的主要致病因素之一。近年来发 德公司；D一葡萄糖、MTT购 自美 国Sigma公司；A779 现 RAS系统存在拮抗AngⅡ的另一旁路——AcE2／ 购 自德国Baehem公司；PI染料购 自美 国BD公司；兔 Ang(1—7)／Mas通路 ，ACE2可直接水解AngⅡ生成 抗大鼠B—aetin、山羊抗兔二抗均购 自美国CellSigna Ang(1—7)，也可水解 AngI生成Ang(1—9)，或者经 1ingTechnology公司 ；兔抗大鼠ACE2、Mas多克隆抗体 由ACE水解生成Ang(1—7)。一方面，Ang(1—7)本 购 自SantaCruz公司；BCA蛋白定量试剂盒 、HRP化学 身具有心血管保护效应 ，另一方面，ACE2的水解过程 发光底物购 白美国ThermoFisherScientific公司；甘露 降低了局部 AngⅡ的含量 ，从而对AngⅡ介导的动脉粥 醇 、DMSO购 自北京鼎国公司。 样硬化起负性调节作用。奥美沙坦酯为新型血管紧张 1．3 实验方法 素受体阻滞剂 (ARBs)，主要通过选择性拮抗 AngⅡ1 1．3．1 原代细胞培养 参考申红远等 介绍的方法。 麻醉 、消毒大鼠后，迅速分离主动脉胸段全长。无菌操 型受体 (AT1R)发挥降压、抗水钠潴留、抗心血管重构 作台里去除 内膜和外膜，将余下 l1『l管