miR-125b通过靶向抑制Smad4调控骨髓间充质干细胞成骨分化.pdfVIP

， 2 ，38(4)h 一 csumea．ors； ：／ 一 -net DOI：10．3969／j．issn．1672-7347．2013．04．002 http：／／xbyx．xysm．net／xbwk／fdeup／PDF／201304341．pdf miR-I25b通过靶向抑制 Smad4调控骨髓间充质干细胞成骨分化 陆细红 ，邓敏 ，贺洪辉 ，曾德辉 ，张卫 (1．南华大学附属南华医院骨科，湖南衡阳421002；2．广州医学院附属肿瘤医院肿瘤研究所 ，广州510183) 【摘要 】目的：研究miR-125b是否通过调控其预测的靶基因Smad4表达而调节骨髓 问充质干细胞 (MSCs)成骨 分化。方法：构建 Smad43-UTR-荧光素酶报告载体，通过荧光素酶报告检测观察miR-125b对Smad43-UTR-荧光素 酶活性的影响；分离培养人骨髓MSCs，在MSCs中转染miR-125bmimics并进行成骨诱导，采用荧光定量PCR(qRT- vcg)和Western印迹检测Smad4表达水平；Smad4siRNA转染MSCs并进行成骨诱导，通过检测碱性磷酸酶 (AKP)活 性及RUNX2mRNA表达水平变化考察Smad4下调对MSCs成骨分化的影响。结果：双荧光素报告检测显示miR-125b 能特异性地与Smad4mRNA的3-UTR结合，抑制其荧光素酶活性 (PO．0s)。过表达miR-125b能抑制MSCs成骨分化 过程中Smad4表达水平 。干扰 Smad4表达能抑制AKP活性及 RUNX2mRNA表达水平，它能部分模拟miR-125b调控 MSCs成骨分化的功能。结论：miR-12Sb通过抑制靶基因Smad4的表达调控MSCs成骨分化。 [关键词 】miR-125b；间充质干细胞；成骨分化；Smad4 m iR-I25bregulatesosteogenicdifferentiationofhuman bonemarrow mesenchymalstem cellsbytargetingSmad4 LUXihongJDENGMin2,HEHonghui，ZENGDehui，ZHANGWei DepartmentofOrthopedics,AffiliatedNanhuaHospitalofUniversityofSouthChina,HengyangHunan421002； 2．CancerResearchInstituteAffiliatedCancerHospitalofGuangzhouMedicalUniversityjGuangzhou51018~China) Objective：ToinvestigatewhethermiR一125bregulatestheosteogenicdifferentiationofbone marrowmesenchymalstemceHs(MSCs)bymodulatingSmad4,apredictedtargetinsilicon． Methods：Smad43-UTR-luciferasevectorwasconstructedanddua1．1uciferasereportergene assaywasemployedtoexaminetlleeffectofmiR-125bonluci~raseactivity．M SCswereisolated andculturedfrom humanbonemarrow,andthentransfectedwithmiR-125bmimicsfollowed byinductionofosteogenicdifierentiation．qRT-PCR andW_esternblotwereusedtodetectthe expressionsofSmad4mRNAandprotein．M SCswereinducedintotheosteoblastsaftertransfecting