microRNA-146a重组慢病毒载体局部应用治疗免疫介导性内耳病的实验研究.pdfVIP

医学研究生学报 2016年8月 第29卷 第8期 JMedPostgra。Vo1．29，No．8，August．2016 ·801 · 论 著 (基础研究) microRNA一146a重组慢病毒载体局部应用治疗免疫介 导性 内耳病的实验研究 罗晨曦，李 涛，谭长强，黄 和 [摘要】 目的 自身免疫性内耳病(autoimmuneinnereardisease，AIED)是 目前临床上一部分可以有效治疗的内耳疾 病，对其的研究工作具有重要的临床实际意义和实用价值，文中探讨microRNA．146a对免疫介导性内耳病(immune．mediated innereardisease，IMIED)的免疫调节作用、及其治疗效果。 方法 采用钥孔戚血蓝蛋白抗原在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免 疫，制成IMIED动物模型30只，按配对设计分为microRNA．146a重组慢病毒组、空载慢病毒对照组、模拟手术对照组 3组。 microRNA-146a重组慢病毒组：鼓阶内注射microRNA．146a重组慢病毒；空载慢病毒对照组：鼓阶内注射慢病毒空载体 ；模拟手 术对照组：鼓阶内注射PBS溶液。分别于免疫前、免疫后和鼓阶注射 1周后 ，测试听觉功能和血清抗 KLH特异性抗体水平变 化。鼓阶内注射后 1周(ABR试验后)，每组3只动物行 HE染色和光镜观察 ；另 3只动物行荧光观察(慢病毒载体转染情 况)；，4只动物并测试内耳局部组织microRNA一146a的含量及其变化。 结果 3组动物免疫后血清中特异性抗 KLH抗体水 平较免疫前升高，重组慢病毒载体组[(1．90．4-0．74) (0．09±0．O1)，P0．05]，空载体对照组[(2．20±0．75) (0．11± 0．02)，P0．05]，模拟手术组[(2．10±0．64)V8(0．11±0．03)，P0．05]。与免疫前对应耳比较，免疫后、鼓阶注射后ABRⅢ 波平均阈值均增加 (P0．05)；与免疫后对应耳比较，重组慢病毒载体鼓阶内注射后ABR111波平均阈值降低 (P0．05)。重 组慢病毒载体组内耳microRNA一146a含量 (1290．0±660．0)较空载体对照组 (369．5±73．9)和模拟手术组 (476．6±148．0)明 显升高，差异有统计学意义(P0．05)。荧光观察显示 ：micro．RNA146a重组慢病毒载体在内耳中分布在骨螺旋唇、螺旋神经 节传人纤维、螺旋韧带基底细胞、Corti器、血管纹等，内耳光镜观察显示内耳免疫炎性反应较空载慢病毒对照组和模拟手术对 照组明显减轻。 结论 micro—RNA146a重组慢病毒载体经鼓阶注射到内耳后 ，可在内耳广泛分布和转染 ，内耳组织中mi— croRNA一146a的含量明显升高。重组 micro-RNA146a慢病毒载体内耳导人可显著减轻内耳免疫炎性病理损伤和听觉功能 障碍。 [关键词】 microRNA一146a；免疫介导性内耳病；基因治疗；豚鼠 【中图分类号】 R763．34 【文献标志码] A [文章编号】 1008—8l99(2016)O8801_o7 [DOI】 10．16571／j．cnki．1008．8199．2016．08．004 LocalinjectionofthemicroRNA-146arecombinantlentiviralvectorintotheinnerearforimmune-mediated innereardiseaseinguineapigs LUO Chen．xi，LITao ，TAN Chang．qiang ，HUANGHe (1．SchoolofPharmaceuticalsciences，NanfingTechUniversity，Nanfing211800，Jiangsu，China；2．NanjingDrum TowerHospitalTheAffiliatedHospitalofNanfingUniversityMedicalSchool，Nanfing210008，Jiangsu，China；3．