miRNA-29a对平滑肌细胞增殖凋亡的影响.pdfVIP

重庆 医学2015年 12月第44卷第 35期 4925 论著 ·基础研究 doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2015．35．009 miRNA一29a对平滑肌细胞增殖凋亡的影响 冯洪涛，李红普△ (河南郑州市人 民医院普外二科 450000) [摘要] 目的 检测 miRNA-29a在腹主动脉瘤患者与正常人血清 中的表达差异 ，探讨 miRNA一29a过表达对人腹主动脉平 滑肌细胞(HVSMCs)增殖凋亡的影响。方法 收集该院 2O11年 3月至 2014年 3月间确诊腹主动脉瘤患者血清标本 25例 ，平均 年龄 (62．9±13．6)岁；同期收集与其年龄相匹配的正常老年人血清标本 25例，平均年龄 (61．5±l1．8)岁。用RT-PCR分别检测 其miRNA-29a表达。构建人重组慢病毒载体Mc CM、厂_miRNA；将构建载体MCS-CMV—miRNA29a转染HVSMCs细胞 ，荧光 显微镜下观察其转染效率，RT—PCR及Westernblot法检测转染后各组细胞中miRNA一29a和 miRNA-29a靶基因C0L1A1的表 达，最后应用AnnexinV／7一AAD双染法检测转染后 72h对HVSMCs细胞凋亡的影响。结果 在腹主动脉瘤患者中miRNA一29a 表达较正常人低 。构建的重组慢病毒载体 McS_CMV-miRNA-29a转染效率为(74．25±10．1O)％，转染后 miRNA-29a及蛋 白表 达在靶细胞较对照组增多，MTS及 AnnexinV显示 miRNA-29a过表达后细胞增殖增多，凋亡减少。结论 成功构建携带 mIR— NA一29a慢病毒栽体 ，转染后 miRNA-29a稳定表达 ，miRNA_29a过表达可促进细胞增殖 ，抑制其凋亡。 [关键词] 主动脉瘤，腹；miRNA-29a；慢病毒载体；肌细胞，平滑肌 [中图分类号] R654．4 [文献标识码] A [文章编号] 1671—8348(2015)35—4925—04 TheeffectofmiRNA-29a on theproliferation andapoptosisofHVSM Cscells FengHongtao，LiHongpu ( eSecondDepartmentofGeneralSurgery，ZhengzhouPeoplesHospital，Zhengzhou，Henan450000，China) -[Abstract] 0bjective TodetecttheexpressionofmiRNA-29ainabdominalaorticaneurysm(AAA)patientsandconstructa recombinantlentiviralvector carrying miRNA一29a。transfeetion of human abdominal aortic vascular smooth muscle cells (HVSMCs)，andtoinvestigatethealterationontheproliferationinHVSMCs．Methods Collected25AAA patients serum and25 normalelderlyserum specimensfrom March2011toMarch2014，themeanagewere62．9±13．6and61．5±11．8separately．Em- ployRT—PCR analysisthemiRNA一29 expression in differentgroup．TheMC CMV—miRNAr29awastransfectedintoHVSMCs cells，thetransfectionefficiencywasobservedwithfluorescencemicroscope，themRNA andCOL1A1proteinexpresstionwasdetec— tedbvRT—P