pDNA的基因活化基质转染骨髓间充质干细胞的效果比较.pdfVIP

第 42卷第 6期第 669页 华 中科技大学学报(医学版) Vo1．42 No．6 P．669 2013年 12月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2O13 两种复合阳离子聚合物 ／pDNA 的基因活化基质 转染骨髓 问充质干细胞的效果比较 彭 琳 ， 高 原△ 四Jil大学华西 口腔 医院，成都 610041 摘要 ：目的 比较 2种复合阳离子聚合物 ／pDNA 的基 因活化基质转染骨髓 间充质干细胞 (bonemesenchymalstem ce11s，BMSCs)的效果。方法 以壳聚糖／胶原复合支架为基质材料，以壳聚糖 ／pDNA复合物或PEI／pDNA复合物为基因传 递系统，合成了2种不同的基 因活化基质(gene-activatedmatrix，GAM)。以含有裸 DNA 的GAM作为对照，将 BMSCs种植 于各组 GAM 中共培养 7d，采用 MTT法通过检测细胞的吸光度值测定细胞的增殖能力，检测各种 GAM 的细胞相容性 ；各 组 GAM采用共培养转染和直接转染 2种方式体外转染BMSCs，通过检测萤光素酶表达水平 比较各种 GAM体外转染BM— SCs的能力 。结果 与对照组相 比，含有壳聚糖 ／pDNA复合物的GAM并未影响BMSCs的增殖(PO．05)，具有 良好 的 细胞相容性 ；而与含有 PEI／pDNA复合物的GAM共培养 的BMSCs增殖能力 明显低于对照组 (PO．05)，对 BMSCs具 有一定的细胞毒性 。采用共培养转染方式，壳聚糖 ／pDNA与 PEI／pDNA复合物组均获得比对照组高的转染结果 (1．28 ×10，1．62×10vs．2．14×10 RLU／mgprotein)，但两复合物组相 比差异无统计学意义 (PO．05)；采用直接转染方式 ， 壳聚糖 ／pDNA组的萤光素酶表达水平与对照组相 比差异无统计学意义 (4．51×10vs．3．23×10RLU／mgprotein，P 0．05)，而 PEI／pDNA组的表达水平 (2．5O×10RLU／mgprotein)高于对照组(PO．05)。结论 含有壳聚糖 ／pDNA复 合物 的GAM，体外共培养转染 BMSCs具有较好的生物相容性及一定的转染能力，具有用于体 内基因治疗的潜力 。 关键词 ：基 因活化基质 ； 阳离子聚合物 ； 骨髓 间充质干细胞 ； 壳聚糖 ； 聚乙烯亚胺 中图分类号 ：R318．08 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2013．06．010 ComparisonofEfficacyofTwoCationicPolymer／pDNANanoparticle-embedded Gene-activatedM atrixesinTransfectionofBoneM esenchymalStem Cells PengLin，GaoYuan△ WestChinaHospitalofStomatology，SichuanUniversity，Chengdu610041，China Abstract O ective Tocomparetheefficacyoftwocationicpolymer／pDNA nanoparticleembeddedgene—activatedmatri— xes(GAM)inthetransfectionofbonemesenchymalstem cells(BMSCs)．Methods TwodifferentGAMsweresynthesizedwith chitosan／collagencompositescaffoldasmatrixmaterialsandchitosan／pDNA complexesorPEI／pDNA complexesasgenedeliv erysystems．Naked DNA embedded in the GAM served as contr