PTEN基因对子宫内膜癌细胞P13K／AKT通路的影响.pdfVIP

第 32卷 第 6期 中山大学学报(医学科学版) Vol_32 No．6 2011年 11月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Nov． 2O11 · 基础研究 · P删 基因对子宫内膜癌细胞PI3K／AKT通路的影响 许成芳 ， 李小毛 ， 李 田， 王小韵 (中山大学附属第三医院妇产科 ，广东广州 510630) 摘 要：【目的】探讨Jp7Ⅳ基因在子宫内膜癌PI3K／AKT通路中的作用，评估P陋Ⅳ基因在抗肿瘤治疗中的意义。方【 法】利用慢病毒载体系统，构建人 基因RNA干扰慢病毒载体和用 Ⅳ基因过表达慢病毒载体，分别转染PTEN野生 型的HEC一1A细胞和 PTEN突变型的Ishikawa细胞 ，建立 刀 Ⅳ基因敲减及过表达的细胞模型，Westernblot方法检测PTEN 基因敲减或过表达前后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况 ，MTT法检测慢病毒转染前后细胞增殖的变化 ，流式细胞 术检测慢病毒转染前后细胞周期及细胞凋亡率的变化。【结果】①HEC．1A细胞转染p|7Ⅳ基因干扰慢病毒载体后，细胞的增 殖曲线和细胞凋亡率与对照组比较无明显变化。但 Ishikawa细胞转染 PTEN基因过表达慢病毒载体后 ．增殖曲线和细胞凋亡 率显示其生长呈明显抑制状态。②当HEC一1A细胞转染了RNA干扰病毒后 (HEC．1A．RNAi)．Westernblot结果显示PTEN蛋 白表达下调 ，其 EGFR，p-EGFR．mTOR，p-mTOR，AKT，p-AKT蛋 白表达增强 ，当Ishikawa细胞转染了过表达载体病毒后 (Ishikawa．PTEN)，Westernblot结果显示其 PTEN蛋白表达上调 ，p-EGFR，p-mTOR．AKT，p-AKT蛋白表达减弱。③HEC一1A— RNAi细胞周期中G1期细胞比例减少 ，S期细胞 比例增加，Ishikawa—PTEN细胞周期 中G1期细胞比例增加 ，S期细胞比例减 少。 【结论】PTEN基因可以抑制细胞增殖过程，有可能成为子宫内膜癌患者基因治疗的选择之一。 关键词：慢病毒载体 ；PTEN基因；子宫内膜癌；AKT；PI3K 中图分类号：R711．74 文献标志码：A 文章编号：1672—3554(2011)06—0701—07 EffectOfDifferentP 卧 StatusonPDK／AKTPathwayofEndometrialCancerCellLines xu Cheng-fang，LIXiao-mao ，LITian，WANGXiao—yun (DepartmentofObstetricsandGynecology，ThirdAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity，Guangzhou510630，China) Abstract：【Objectives】ToexplorethefunctionofP陋ⅣgeneinthePI3K／AKTpathway，toevaluatethefunctionofPTENgene inantitumortherapy．M【ethods】Twolenfiviralvectorswereconstructed：onewasusedtoconducttheRNAinterferenceagainst尸 Ⅳ gene．anotherwasusedtoover—expressthewildtypePTEN gene．Thesetwovectorsweretransductedintothetwoendometrialcancer celllineswithdifferentPTENstatus．CellviabilitywasevaluatedbyMTFassay．Cellapoptosisandcellcyclewereevaluatedbyflow cytometry． Westernblottingwasperformedtoevaluatetherelatedprotein alterationin