RNA干扰下调SPHK1基因表达抑制胃癌细胞增殖.pdfVIP

第34卷 第 3期 中山大学学报 (医学科学版) Vo1．34 No．3 2013年 5月 JOURNALOFSUNYAT-SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) May． 2013 · 基础研究 · RNA干扰下调SPHK1基因表达抑制胃癌细胞增殖 张娈景 ，夏金堂 ：，张珑涓 ，简卫华 ，赖越元 ，陈连周 ，黄晓卉 ，李 雯 (1．中山大学附属第一医院普通外科实验室，广东广州 510080；2．广州医学院附属广州市第一人民医院肝胆 外科 ，广东 广州510180) 摘 要：【目的】应用RNA干扰方法下调鞘氨醇激酶 1(SPHK1)基因表达，研究SPHK1对胃癌细胞SGC一7901、MGC一803 细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方【法】免疫组织化学法检测5对 胃癌及癌旁组织的SPHK1蛋白表达量；构建质粒、 制备逆转录病毒并感染 胃癌细胞株SGC一7901、MGC一803，筛选并鉴定 SPHK1一RNAi和对照载体 (RNAi—Vector)稳定表达细 胞株；MTr法检测胃癌细胞的增殖变化；Westernblot法检测SPHK1、p21、p27、Akt、P—Akt、Rb、p-Rb蛋白的表达水平。【结果】 SPHK1蛋白在 胃癌组织中过表达；与对照组比较 ，两株SPHK1一RNAi稳定表达的胃癌细胞 SGC一7901、MGC一803中SPHK1 表达显著下调，抑制率分别为81．2％、65．1％；SPHK1一RNAi胃癌细胞增殖能力较对照组显著减弱；SPHK1一RNAi胃癌细胞的 磷酸化Akt及磷酸化Rb蛋白表达明显降低，而p21、p27的蛋白表达水平明显上调。 【结论】下调SPHK1基因表达能抑制胃 癌细胞的增殖 ，其机制可能与细胞内Akt信号被减弱，细胞周期抑制蛋白p21、p27的表达上调有关。 关键词：鞘氨醇激酶 1；胃癌细胞 ；细胞增殖 ；Akt 中图分类号 ：R735．2 文献标志码：A 文章编号 ：1672．3554(2013)03—0321—05 RNA InterferenceDown-reguratesSPHK1GeneandInhibitsProliferation OfGastricCancerCell ZHANGLuan-jing，XIAJing—tang；，ZHANGLong-juan，JIANWei-hua，LAIYue-yuan。， CHENLian—zhou ，HUANGXiao—hui，LIW en (1．LaboratoryofDepartmentofGeneralSurgery，TheFirstAffiliatedHospitalofSunYat—SenUniversity，Guangzhou510080，China； 2．DepartmentofSurgery，TheFirstPeople’SHospitalofGuangzhou，GuangzhouMedicalCoHege，Guangzhou510180，China) Abstract：O【bjective】ToinvestigatetheeffectsandpossiblemechanismofSPHK1ontheproliferationofhumangastriccancer celllinesSGC-7901，MGC-803byusingRNAinterferingmethods．M【ethods】TheexpressionofSPHK1proteinoffivepairsofgastric tumortissuesandadjacentnon—tumortissueswasdetectedbyimmu．nohistochemistry．Theplasmidswereconstructedandretroviruses weretransfectedintoSGC-7901andMGC一803cellsrespectively．Th estableSPHK1-RNAian