PYK2介导H460肺肿瘤细胞失巢凋亡抗性的机制.pdfVIP

第32卷 第3期 中山大学学报 (医学科学版) Vol_32 No．3 2011年 5月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Mav． 2011 PYK2介导H460肺肿瘤细胞失巢凋亡抗性的机制 赵伟锋 ，‘梁星丽 ，张 蓉 ，丁 娅 ，彭瑞清 ，张晓实 ，张 星h (华南肿瘤学国家重点实验室 ／／中山大学肿瘤防治中心 1．生物治疗科 ；2．内镜科，广东广州 510060； 3．黄河中心医院肿瘤科．河南 郑州 450004) 摘 要：【目的】研究蛋白激酶 PYK2对悬浮状态下的肺癌细胞H460失巢凋亡抗性的作用和PYK2的下游通路蛋白。 【方法】RNA干扰实验采用逆转录病毒载体介导的稳定表达系统降低 PYK2蛋白的表达；细胞悬浮培养实验用polyHEMA培 养方法；用PARP断裂带和DAPI荧光染色检测细胞凋亡情况；细胞侵袭能力用侵袭小室实验；磷酸化蛋白激酶水平用免疫 印记实验检测。 【结果】用RNA干扰沉默能够降低H460细胞中PYK2蛋白的表达。抑制PYK2的表达能够降低悬浮培养 H460细胞增殖能力和促进细胞凋亡增加。此外 ，沉默PYK2的表达能使肿瘤细胞侵袭能力下降，并降低磷酸化Paxillin和 Src的水平，但不能降低磷酸化JNK、AKT和ERK的水平。 【结论】PYK2信号通路在H460肺癌细胞失巢凋亡抗性中起重要 作用，Paxillin和Src可能是PYK2的下游通路蛋 白。 关键词 ：H460；失巢凋亡抗性：PYK2；Paxillin；Src 中图分类号 ：R734．2 文献标志码 ：A 文章编号：1672—3554(2011)03—0297—06 M echanism ofAnoikisResistanceM ediatedbyPYK2inH460LungCarcinomaCells ZHAO Wei—feng，LIANG Xing·li，ZHANG Rong2，DING Ya，PENG Rui—qing，ZHANG Xiao—shi，ZHANG Xing (1．DepartmentofBiotherapy，2．DepartmentofEndoscopy，StateKeyLaboratoryofOncologyinSouthernChina／／CancerCenterofSun Yat—senUniversity，Guangzhou510060，China；3．DepartmentofOncology，CentralHospitalofYellowRiver，Zhengzhou450004，China) Abstract：【Objective】 ToinvestigaterolesofproteinkinasePYK2inanoikisresistanceoflungcarcinomaH460cells，and thedownstreamsignaltransductionofPYK2．M【ethods】ThestableknockdownofPYK2expressionwasachievedbyRNAinterference experimentsmediatedbyRetrovirusvector． TheexperimentofsuspensionculturewasusedbypolyHEMA culturesystem． PARP cleavageandDAPIdyewereusedtodetectthecellapoptosis．Transwellchamberwasusedtodeterminethecellinvasiveability．The phosphorylatedlevelofproteinkinasewasinvestigatedbyWesternblot．【Results】ThelevelofPYK2proteininH460cellsreducedby RNA interferencesystem． TheinhibitionofPYK2expressioncoulddecreasetheproliferationofH460tumorcellsandincreasethe apopto