RNA干扰对体外培养HUVECs增殖和CD105表达的影响.pdfVIP

第 4O卷第 6期第 662页 华 中科技大学学报 (医学版) Vo1．40 NO．6 P．662 2011年 12月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2O11 RNA干扰对体外培养 HUVECs增殖和 CD105表达的影响 丁 怡 ， 张 明昌。△ 中国人 民解放军广州军区武汉总医院眼科 ，武汉 430070 。华 中科技大学同济医学院附属协和医院眼科 ，武汉 430022 摘要：目的 应用RNA干扰技术 (RNAi)研究针对 CD105的小片段 RNA(siRNA)抑制 CD105在体外培养的人脐 静脉 内皮细胞 (HUVECs)中表达的情况，观察 CD105沉默后对细胞生长的影响。方法 根据人的CD105mRNA序列 选择3个不 同的靶位点，分别合成 3条 CD105siRNA，并 同时合成阴性对照和阳性对照 siRNA。采用脂质体介导的基 因 法转染至体外培养的HUVECs中，采用RT-PCR检测各组细胞 CD105表达水平，Westernblot检测干扰前后CD105蛋 白表达水平 ，并用 MTT法检测人 HUVECs的细胞活力 。结果 RT_PcR和 Westernblot检测表 明，3号 CD105siRNA 能最有效沉默 CD105的表达 ，转染后 的 HUVECs中CD105mRNA水平和蛋 白表达水平 明显下降。MTT结果表 明 CD105的下调导致 了HUVECs活力的下降。结论 特异性的 siRNA可以下调 HUVECs中CD105mRNA及蛋 白表达 水平 ，减低细胞活力 。也提示 CD105可能对体外培养 HUVEcs的生长有促进作用 ，cD1O5可 以作为治疗新生血管的 靶点。 关键词 ：RNA干扰 ； CD105基 因； 人脐静脉 内皮细胞 ； 基 因沉默 中图分类号 ：R349．64 DOI：10．3870／j．issn．1672-0741．2011．06．007 EffectofSilencingCD105 GenewithsiRNA on Proliferation ofHUVECsandExpressionofCD105 DingYi¨．ZhangM ingchang△ DepartmentofOphthalmology，WuhanGeneralHospitalofGuangzhouMilitary，Wuhan430070，China DepartmentofOphthalmology，UnionHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceand Technology，Wuhan430022，China Abstract 0bjective ToinvestigatetheeffectofsilencingCD105geneexpressionwithsiRNAontheproliferationofhu— manumbilica1veinendothelialcells(HUVECs)andCD105mRNA andproteinexpression．Methods HUVECswereculturedin vitroandtransfectedwithsiRNA ofCD105by1ipofectamine2000．Theexpression1evelsofCD105mRNA and protein before andaftertransfectionweredetectedbysemi—quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT—PCR)andW estern blotrespectively．ApoptosisofHUVECsinduced byCD105 si