转sTNFR基因处理对供心缺血-再灌注损伤的保护作用.docVIP

　　转sTNFR基因处理对供心缺血/再灌注损伤的保护作用 ：韩从辉 郑巍 董秉政 郝林 詹鸣 李怀富 张明 闵志廉 郑克立 【摘要】 目的 研究可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNFR）基因直接体外灌注转染供者器官的效果，利用小鼠异位心脏移植模型探讨sTNFR基因转染对供心缺血/再灌注损伤的保护机制。方法 实验分3组，每组C57/BL6（H-2Kb）供体鼠和BalB/c（H-2Kd）受体鼠各10只，在0～4℃溶液中对3组C57/BL6（H-2Kb）小鼠的供心分别经主动脉缓慢灌注含编码小鼠sTNFR-p55基因的复制缺陷重组腺病毒载体（AdmsTNFR组）、复制缺陷重组腺病毒载体AdHCVsp1LacZ（AdmLacZ组）的PBS和单纯PBS(对照组)，灌注1 h后，将供心移植给BalB/c（H-2Kd）受体鼠。检测各组移植受体鼠外周血血清sTNFR的表达水平和移植物浸润细胞(GIC)的数量，并分析AdmsTNFR基因修饰后GIC的同种反应活性（MLR）。结果 以2×1012 pfu/L的滴度转染移植心脏后，12 h即可在AdmsTNFR组小鼠的血清中检测到高水平的sTNFR-p55表达，24 h达到分泌高峰，为(59.5±6.5 )μg/L；而AdmLacZ组24 h的sTNFR-p55水平为(1.5±0.56 ) μg/L（Plt;0.05），对照组更低；术后14 天，AdmsTNFR组仍持续表达有效高水平的sTNFR-p55〔(20.1±3.7)μg/L〕。AdmsTNFR组移植心脏的GIC数目为(0.5±0.12)×106/孔，明显低于对照组和AdmLacZ 组的（5.0±2.2）×106/孔（Plt;0.05），其比例为1∶10～1∶20。将不同组的GIC与γ射线(20 Gy)灭活的供体鼠的T细胞作72 h MLR，AdmsTNFR组的GIC增殖受到了明显的抑制，AdmLacZ 组和对照组的GIC则显示较强的对同种刺激的增殖活性。结论 在低温（0～4℃）的条件下可以将编码sTNFR基因的腺病毒成功地转入移植心脏，通过基因表达可长时间维持有效的sTNFR-p55的局部浓度，减轻了受体鼠移植器官内的炎性细胞浸润，并抑制移植器官内浸润细胞的同种反应活性。 【关键词】 sTNFR；转基因；器官移植；心脏；缺血/再灌注损伤；小鼠 Abstract: Objective To investigate the transfection effects of sTNFR gene directly perfused to donor hearts in vitro, and to explore the protective mechanism of sTNFR gene transduction to donor hearts against ischemia-reperfusion injury using the model of heterotopic heart transplantation in mice. Methods The experiment ice and 10 recipient mice. The donor hearts urine sTNFR-p55 (for AdmLacZ sTNFR gene group), replication-defective adenovirus vector AdHCVsp1LacZ (for AdmLacZ vector group) and PBS (for control group) respectively, for 1 h, before the donor hearts ethod. The sTNFR-p55 level in serum and the graft infiltrating cell (GIC) count in each recipient group ined, of the AdmsTNFR gene group 12 hours after the transfection at MOI 2×1012 pfu/L, LacZ vector group uch lo 14 days after transplantation in AdmsTNFR gene group. The GIC count in AdmsTNFR gene groups uch loLacZ vector group (5.0±2.2) ×106/phocytes from donor mice for 72 h MLR, the proliferation of GIC sTNFR gene group, as pared ediated sT