丹参酚酮对大白鼠生殖器官及血清生殖激素水平的影响.docVIP

丹参提取物对大白鼠生殖器官及血清生殖激素水平的影响 1 试验目的 在丹参提取物长期毒性实验中，发现其有增加雄性大鼠睾丸重量的趋势。为验证这一效果，观察是何种成分对大鼠睾丸或其它生殖器官发生的影响以及大鼠生殖激素的变化设计该实验。 2 试验药物 丹参提取物，批号030416，由北京宝泰宁堂生物技术有限公司提供，为长期毒性试验同批样品，红棕色疏松粉末，气微香，易溶于水，主要成分为丹参酮（45%）与丹酚酸（27%）。 丹参提取丹酚酸，棕色粉末，易溶于水； 丹参提取之丹参酮，黑色粉末，难溶于水。 临用时以0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）按需要制为均匀溶液或悬浮液。对照给予0.5% CMC对照液。冰箱贮存，每次配药使用不超过10天。 3 试验动物 5～6周龄雄性SD大鼠80只，体重70～110g，由四川省中药研究所实验动物室提供，清洁级，合格证号川实动制第2002-32号。大鼠于实验室环境适应1周，并确定健康无病后用于实验。 4 试验环境 大鼠试验在四川省中药研究所药理毒理研究室进行，试验场地为慢毒动物试验专用恒温恒湿实验室，环境设施：GB14925-2001，三级，合格证号：医动字室温20～23℃，相对湿度65～85%；荧光灯照明，12h明暗相间；洁净空气，1万洁净度，通气量500L，频度20次/小时，3分钟/每次。大鼠于鼠笼中饲养，每笼5只，鼠笼体积为46×30×16cm。不锈钢材料鼠笼和鼠架，室内鼠密度为206只/米3。大鼠从鼠笼不锈钢丝分隔外饲料箱中自由取食，水瓶自由饮水，水为清洁水，水瓶容量500ml，每日更换新鲜水。 5 仪器 赛多利斯自动平衡天平， FT-613自动计算125I放免测定仪（北京核仪器厂）。 6 试验方法 6.1 分组、剂量、给药方法及周期 同批48只大鼠按雌雄随机分为4组，每组12只，分组及剂量见表1。 表1 丹参酚酮3月给药大鼠分组及给药情况 组别 剂 量 (g/kg) 大鼠 药物 雄性 浓度 (g/100ml) 给药体积 (ml/100g体重) 对照 — 12 12 12 12 — 1 丹酚酸 0.96 9.6 1 丹酮 0.24 2.4 1 丹参提取物 1.2 12 1 每日于上午8:00～10:00时，用胃管灌服给药1次，每周给药6天，连续6月。每周称空腹体重1次，并据以调节给药剂量。 6.2 饲养和管理 试验期间大鼠自由饮水，供给充足固体饲料。每日晨清扫及洗涤粪盘一次。饲料配方符合GB14294.3-2001标准，由四川省中药研究所实验动物研究室自制。 6.3 日程观察及到期处理 每日观察大鼠一般外观、行为，包括体形、体貌、毛色、毛态、活动、对刺激反应、自然孔、耳尾鼻唇爪、粪、尿及摄食、饮水等情况，如有异常则进行记录。给药期限3月，其中于给药1、2月活杀4只/组作中期观察。给药到期，各组大鼠16只于颈动脉放血处死，迅速剖取生殖系统脏器称重，取睾丸组织于10%福尔马林液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，作病理切片观察病变情况。取血液离心后观测血清中卵泡激素、促黄体激素和睾酮三种生殖激素的浓度变化情况。 观察指标 观察指标及时间见表2。 表2 丹参酚酮连续3月给药大鼠生殖器及激素水平影响试验检测项目和检测时间 项 目 每日 每周 给药30天 给药60天 给药90天 体重增长 √ 系统尸检 √ √ √ 脏器系数 √ √ √ 组织病理 √ √ √ 激素含量 √ 7.1 体重 每周定时称量大鼠体重，观察药物对大鼠体重增长的影响；另外，若大鼠个体有体重异常变化者则很可能为疾病或发育异常，为避免其对脏器重量及激素水平测定的干扰，应立即剔除。 7.2 脏器指数 大鼠处理后迅速解剖，仔细剥取睾丸、胸腺、包皮腺、前列腺、精囊腺、球海绵体及提肛肌7种脏器于塞多利斯天平称重，计算脏器指数。 7.3 血样的收集和处理 每批大鼠实验到期后，将试验大鼠空腹断头法处死采血，采血.后立即将装有血样的试管放入37℃恒温箱中静置3小时，然后取出1500转/分离心15分钟分离血清，血清应用放射免疫分析法测定血清中促卵泡激素、促黄体激素和睾酮浓度，仪器所测定的沉淀率(CPM)值扣除本底后换算成百分率(B%)，用DataFit7.1软件求得标准曲线方程，然后由标准曲线方程求出样品中的激素含量。 7.4 病理观察 将大鼠睾丸用10%福尔马林液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，镜检。 8 实验结果 8.1 对体重增长的影响 给药3月对大鼠体重的影响见表3。 从表3结果可以看出，丹参提取物、丹酚、丹酮给大鼠连续灌服1月、2月、3月对大鼠体重增长均无明显影响，且无个体体重异常变化情况。 表3 丹参酚酮对雄性大鼠生殖器及生殖激素影响试