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免疫毒素在治疗白血病中的应用综述 摘要 白血病是血液系统常见的恶性疾病，其治疗手段主要是化疗和骨髓干细胞的移植。尽管化疗和干细胞移植使白血病的预后有了明显的改善，但仍有相当比例的患者复发死亡。随着研究的深入发展，免疫毒素作为新一代药物在临床治疗白血病取得了明显的进展。本文从白血病骨髓体外净化及体内应用两方面对免疫毒素在临床治疗白血病的疗效及副作用作简要介绍。 关键词 白血病 化疗 骨髓干细胞 免疫毒素 体内应用 抗肿瘤 骨髓移植 半衰期 蓖麻蛋白体 毛细血管渗漏综合征 免疫毒素的简介 免疫毒素是化学方法或基因工程方法将肿瘤选择性配体与经修饰的毒素共价连接而成的抗肿瘤剂.毒素可分为单双链两种.蓖麻毒蛋白和白喉毒素是天然蛋白的代表,其A链是细胞毒性部分，进入细胞后抑制核糖体蛋白的合成并破坏细胞。B链与靶细胞膜受体结合，促使A链进入细胞。半毒素是单链核糖体抑制蛋白，它使60S亚单位失活而作用于真核细胞核糖体，在肽链合成水平上导致细胞蛋白合成的不可逆性停止[1]。美洲商陆抗毒蛋白（PAP）有三种免疫学上的不同形式，与蓖麻毒蛋白不同，PAP不与膜受体结合，非特异性毒性较小，所以这些毒素与单克隆抗体结合，即可成为具有靶细胞选择性及治疗潜力的IT[2]。单克隆抗体的选择是根据恶性肿瘤表面抗原性而定。其原理由德国免疫学家Ehrilich早在20世纪初提出。免疫毒素通过与肿瘤细胞表面受体或抗原相结合后内化，继而在胞内抑制蛋白质合成，导致肿瘤细胞死亡。常用的靶向载体包括单克隆抗体如CD3、CD5、CD22 等；细胞因子及生长因子如白细胞介素2(IL一2)、白细胞介素3(IL一3)、粒单集落刺激因子(GM—CSF)等；短肽激素如促性腺激素释放激素等。常用的毒素有蓖麻毒素(ricin)、假单胞菌外毒素(Pseudomonas Exotoxin，PE)、皂草素(Saporin，Sap)、白喉毒素(diphtheria toxin，DT)等。最初的免疫毒素通过异型双功能交联剂如SPDP或SMPT将毒素和单克隆抗体或纯化的细胞因子在体外进行化学交联，配体和毒素之间的化学键常用二硫键，化学交联后去掉游离的配体和毒素。最后所制备的免疫毒素为第一代免疫毒素。在体外试验和临床观察中，第一代免疫毒素都表现出了较好的肿瘤特异性杀伤作用和临床疗效，然而第一代免疫毒素存在很多缺点，如稳定性差、分子量大，渗透性差，免疫原性强，仍有非特异毒性等。 免疫毒素的毒理作用 免疫毒素发挥对靶细胞的杀伤作用至少需要毒素分子的3个不同功能结构趋于相互协调实现。主要包括：免疫毒素分子中手提结合域（通常为抗体细胞因子等）与靶细胞表面相应抗原或手提结合；免疫毒素分子的专为结合域，通过内化和跨膜转运过程，促进毒素分子转运到细胞质中[3]；免疫毒素分子的催化结构域，通过胞内催化抑制蛋白质的合成，导致细胞的死亡。构成免疫毒素的抗体（或细胞因子的配体分子）和毒素，在免疫毒素杀伤靶细胞的过程中发挥不同的重要功能。靶向细胞的作用由特异性抗体和细胞因子完成，免疫毒素在于相应的抗原或受体结合后，引发受体介导的内吞作用的毒素部分则是在免疫毒素进入内吞小体后，经蛋白酶解为有催化活性的毒素结构域，并释放到胞质后，发挥细胞毒活性[4]。 免疫毒素的抗癌机理主要是：能强烈的抑制各种癌细胞的蛋白合成。有些免疫毒素还同时能够激活细胞凋亡过程中的重要蛋白caspase,导致DNA碎裂，引发细胞凋亡，表现为较强的促细胞凋亡的活性[5]；具有很强的抗原性，可经各种途径进入机体，并可产生抗体和过敏反应，抑制巨噬细胞等参与免疫功能。可与IgG发生沉淀反应。它们以酶催化方式发挥作用，毒性很强[6]；通过失活真核细胞胞浆中的核糖体而发挥其毒性。部分细菌性毒素，能够使胞浆中延伸因子的ADP核糖化，抑制了胞浆中蛋白质的合成，导致真核细胞的死亡[7]；直接作用于细胞膜。这类毒素大多数来源于细菌，它们通过破坏细胞膜，在其表面形成小孔，导致细胞内容物泄露，使细胞死亡。由于这类毒素可以直接作用于细胞膜，克服了胞内作用型毒素因内化效率低而引起的细胞毒性较差的缺点，所以将成为非常有潜力的免疫毒素新型的弹头成分[8]。它在一定程度上降低了向瘤体浸润的难度，对实体瘤的治疗可能更有效。 3.骨髓体外净化 用IT净化异基因骨髓移植中供髓的T细胞，可有效地预防移植物抗宿主病（GVHD）。但是大量清除供髓的T细胞影响植入，而且损害移植物抗白血病（GVL）作用。现在正研究利用IT除去某一淋巴细胞亚群来预防GVHD而不影响GVL. 自体骨髓移植前，患者骨髓也要体外净化，清除残存白血病细胞，移植前腰给予病人亚致死量的化疗及放疗，以清除体内残存白血病祖细胞（LPC）[9]。体外骨髓净化的失败或移植前未能彻底消灭LPC，可能是自体骨髓移植失败的关键原因。 Kreit