双歧杆菌的研究进展和应用.docVIP

双歧杆菌的研究进展 1.3种类 根据DNA的同源性和糖发酵研究发现双歧杆菌属共分为24个种。而人类来源的只有12个种，其中能在人体肠道内定植并能用于制备保健食品的双歧杆菌主要有两歧双歧杆菌(Bifidobacterium.bifidum)青春双歧杆菌(Bifido adolescentis)婴儿双歧杆菌(Bifido.infantis)短双歧杆菌(Bifido.breve)和长双歧杆菌(Bifido.1ongum)5种。 1.4　营养要求　 双歧杆菌培养中氨基酸、维生素、核酸物质和盐类必不可少,如果缺乏天冬氨酸则菌的活性降低50%,如缺少含硫氨基酸(半胱氨酸和蛋氨酸)则活性完全丧失。维生素中B1、B2、B6、尼克酸、泛酸也是必需物质,有些菌种还需要叶酸。存在于人乳中的N-乙酰葡萄糖胺及其糖类,对双歧杆菌有特殊的促进增殖作用,被称为双歧因子Ⅰ,酪蛋白经水解而产生的肽也具有促进双歧杆菌增殖的作用,称为双歧因子Ⅱ,异构乳糖、低聚果糖(FOS)、半乳糖低聚糖(GOS)、泛酰巯基乙胺也具有双歧因子的功能。 2. 双歧杆菌的检测方法 目前，双歧杆菌的检测技术主要可分为两大类，一类是以传统的平板菌落计数为基础的检测技术;另一类是以分子生物学为基础的各种检测技术。 2.1双歧杆菌常规检测技术进展 与其它细菌一样，双歧杆菌的常规检测技术主要是各种表型特征、化学分类性状、血清学特征等为依据的。目前市场上双歧制品多以双歧制品与嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌等双菌或多菌联用。因此，双歧杆菌常规检测技术的主要目的就是将之与其混合培养的其它菌种分离开来。 2.1.1双歧杆菌的选择性培养基检测 双歧杆菌选择性计数的原理是在培养基中添加抑制其它菌群的抗生素，或采用棉子糖、低聚糖等其它菌群无法利用的糖类，从而达到选择性检出双歧杆菌的目的。添加的抗生素主要包括：新霉素、巴龙霉素、萘啶酮酸、氯化锂等。由于双歧杆菌内种不同，到现在还没有一种通用的双歧杆菌培养基可用于全部双歧杆菌的选择性检测。值得注意的是，有许多双歧因子，如西红柿汁、肝浸汁、乳糖糖浆、人乳清-(2,6)-果糖低聚糖等[]，均可促进双歧杆菌的生长。可在双歧杆菌培养基中添加这些物质以促进双歧杆菌的生长。加富布氏培养基（AMC）和添这些物质以促进双歧杆菌的生长。加富布氏培养基（AMC）和添加半胱氨酸的MRS培养基被认为是工业品控实验室的较佳选择[] 。 2.1.2双歧杆菌ELISA检测技术 ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种高效的免疫学检测方法。测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。洗涤，使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，使之反应并结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入可与酶反应的底物后，底物被催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。反应中酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使得测定方法达到很高的敏感度。近\年来许多学者报道了使用此方法检测样品中的双歧杆菌。 2..1.3 双歧杆菌酶学检测技术 双歧杆菌属中大多数细菌细胞的抽提物中具有F6PPK。 一般认为检测出F6PPK可作为鉴定双歧杆菌属细菌的重要特征之一。。E. Vlkova[]等对F6PPK、α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶的活性进行检测，并将检测结果与经典培养计数法、荧光原位杂交法的结果进行比较，并无明显差异。 所有的阳性样品均表现较高的α-半乳糖苷酶和β-葡糖苷酶活性， 而阴性样品缺乏此两种酶一种或两种的活性。且所有的阴性样品均不表现F6PPK活性。 此外，许多相关研究中也经常采用检测F6PPK酶活的方法来作为参照[]。 2.2双歧杆菌分子生物学检测和鉴定技术进展 传统的细菌生化反应并不能有效地对各种生境分离出来的菌株进行分类和鉴定，所以只有采取多种手段并用，即采用基因型和表型特征相结合的办法才能够对不同的双歧杆菌菌株进行分类。随着近年来分子生物学发展，采用分子生物学方法对双歧杆菌进行属、种、株水平鉴定已有较大进展。 2.2.1 特异性核酸前体或探针直接检测 通过对细菌rDNA序列进行分析，尤其是对16S rDNA序列进行分析，可以从基因序列中得到不同种系发生水平的多个区域的特定基因信息，如科、属、种及亚种水平的基因信息。因此，可以通过检测某种或某些种微生物的特定序列来证明其存在。但这需要精确设计科特异性探针、属特异性探针和种特异性探针 作为前提。寡核苷酸探针法可以直接检测特异核苷酸序列。其一般操作是提取样品DNA或RNA，固定在正电荷膜（尼龙膜，硝化纤维膜）上，然后用放射性标 记、化学荧光标记或地高辛标记的探针或DNA片断与之杂交，检测信号即可得出阳性结果