体外模拟缺血再灌注条件下bv-2细胞tlr4信号途径对tlr2表达的影响和意义.docVIP

中青年优秀论文评奖 体外模拟缺血再灌注条件下BV-2细胞TLR4信号途径对TLR2表达的影响和意义 单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科 邮编：430022 武汉， 作者：张清 孙鹏 姚尚龙 【摘要】 目的 研究在体外模拟缺血再灌注损伤条件下BV-2细胞的TLR4信号途径对TLR2表达的影响和意义。方法 将培养的BV-2细胞随机分为N组（正常培养组）、组(缺血再灌注组将培养细胞放入糖D－Hank’s平衡盐溶液缺氧培养3h，再重新置于完全培养液复氧培养24h)、T组（缺血再灌注＋TLR4－siRNA转染组，转染质粒pEGFP－H1/TLR4－siRNA）、C组（缺血再灌注＋对照siRNA转染组，转染含对照序列的质粒pEGFP－H1/对照－siRNA）和B组(缺血再灌注＋空白质粒转染组，转染 pEGFP-H1空质粒）五组。建立缺血再灌注的体外模型，RT-PCR法检测各组BV-2细胞中TLR24mRNA和NF-κB p65 mRNA的表达，Westernbolt方法检测各组BV-2细胞中TLR24蛋白表达情况，ELISA检测各组细胞上清液中TNF-α表达情况。组（正常培养组）、组(组)、RT-PCR法检测各组BV-2细胞中TLR24mRNA表达变化。结果 体外模拟缺血再灌注处理后，C组、B组、H组和T组 BV-2细胞中TLR2，4mRNA及蛋白，NF-κB p65 mRNA表达水平均较N组明显高表达，上清液中TNF-α含量也显著性增高（P 0.01）；但与C组、B组和H组分别比较，T组BV-2细胞中TLR2，4mRNA及蛋白，NF-κB p65 mRNA表达和上清液中TNF-α含量有所下调(P 0.01)。而C组和B组BV-2细胞中各项检测指标与H组相比差异无明显统计学意义 (P 0.05)。TLR2和TLR4mRNA的表达与I/R组和NS组相比显著降低（P 0. 01)，且TLR2表达的下降程度强于TLR4。而I/R组与NS组相比，TLR2和TLR4 mRNA表达差异无明显统计学意义 (P 0.05)结论 缺血再灌注诱导TLR4受体激活后有可能通过NF-κB的介导，进一步影响TLR2的表达，从而导致炎症反应的链式放大加重了缺血炎性损伤的过程 【关键词】Toll样受体4；Toll样受体缺血再灌注；小胶质细胞schemia/reperfusion in vitro Department of Anesthesia, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430022, China ZHANG Qing, SUN Peng, YAO Shanglong Background We investigated the effect of TLR4 signaling on TLR2 expression and its significance during mimic cerebral ischemia/reperfusion(I/R) in vitro. And firstly to observe the TLR2 expression in mouse microglia of the cell line BV-2 transfected with the plasmid of pEGFP－H1/TLR4－siRNATLR4 expression via RNA interference(RNAi) mechanism and then to observe the effects of PDTC on expressions of TLR2 and TLR4 during mimic cerebral I/R in vitro. Methods In the first experience BV-2 cells were cultured and divided into normal group(group N), ischemia/reperfusion treatment group(group I/R), the plasmid of pEGFP－H1/TLR4－siRNA pEGFP－H1/control sequence－siRNA transfected group(group C) and blank plasmid transfection group (group B). And the cells in groups T, C and B were culture