植物的组织培养技术补习讲义.docVIP

植物的组织培养技术 植物组织培养技术原理 原理： 细胞的全能性；细胞分化 （细胞的全能性概念：生物体细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成完整个体所必需的全部基因。全能性的比较：受精卵生殖细胞体细胞； 细胞分化的概念：在植物的个体发育过程中，细胞的形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。原因是特定基因在一定的时间、空间选择性表达的结果。 意义：形成各种不同的细胞和组织，具有不同的生理功能。 特点：持久性；稳定性；全能性） 2、必要条件：细胞离体；一定的营养物质、激素和其他外界条件（外植体：从活植物体上切下来进行培养的那部分细胞、组织或器官） 3、植物组织培养的应用：培育无病毒植株；生产药物等有效代谢产物；人工种子；诱变育种 菊花的组织培养 重点和难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术 1、植物组织培养过程：离体的植物组织或细胞——愈伤组织——根芽分化——植物体 （细胞分裂素与生长素的比例 脱分化1:1；芽分化 生长素细胞分裂素；根分化 生长素细胞分裂素） 2、影响植物组织培养的因素: 材料的种类（一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养，入芦荟、海棠等） 材料的年龄（菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝） 保存时间的长短 适宜的培养基（MS培养基主要成分：大量元素N、P、K、Ca、Mg、S等；微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等；有机物：氨基酸、烟酸、维生素、蔗糖等） 植物激素（生长素，细胞分裂素，赤霉素） Ph、温度、光照等（pH控制在5.8左右，温度控制在18~22℃，每天用日光灯照射12h） 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利于分化 先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞即分裂也分化 同时使用 分化频率高 思考：MS培养基中各种营养物质的作用分别是什么？与微生物培养基比较，MS培养基配方有哪些明显的不同？ ①微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐(在胡萝卜胚状体的分化中，若培养基中仅含硝酸盐则不能分化，只有铵盐同时存在时才会产生胚状体的分化；微量元素的用量极微，过量会引起植物细胞的酶系失活、代谢障碍和蛋白质变性以及组织死亡等毒害现象)；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。琼脂作为凝固剂，一般使用浓度0.6—1%。 ②微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 3、实验操作 3.1 制备MS培养基 ①MS培养基母液的配置 培养基各种成分浓度均扩大一定倍数，计算用量并称量，溶解配成浓缩液，即母液。 ②培养基使用液的配置 取适量母液稀释，加入蔗糖和琼脂，定容并调节pH值至5.8-6.0。 ③灭菌 采用高压蒸汽灭菌法灭菌（121℃，20-30min）。 3.2 外植体消毒 ①取材 ②消毒：流水冲洗—加少许洗衣粉刷洗—流水冲20min—放入70%酒精中摇动2~3次，吸干水分—放入质量分数0.1%氯化汞溶液中浸泡1~2min，无菌水冲洗2~3次，吸干水分 ③接种 ④培养：2周时间出现愈伤组织 约20天更换培养基进行继代培养 更换培养基诱导根芽分化 ⑤移栽 炼苗：先在外界环境闭瓶锻炼3天，再开瓶锻炼3天 移栽：去掉培养基，可现在灭菌的珍珠岩或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中 3.3 对照实验 空白对照，组内对照 植物组培污染途径包括：外植体带菌；培养基及接种器具灭菌不彻底；接种操作时带入；环境不清洁 思考：在整个操作过程中，是如何来实现无菌的？ 培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）；外植体的消毒（酒精、氯化汞）；接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）；无菌箱中培养；移栽到消过毒的环境中炼苗 月季的花药培养 花药离体培养概念及应用：把花粉发育到一定阶段的花药接种到培养基上，来改变花药内花粉粒的发育程序，使其分裂形成细胞团，进而分化成胚状体，形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株。 原理：细胞的全能性 基本过程：花药——愈伤组织（胚状体）——丛芽——生根——移栽 4、被子植物的花粉发育要经历：四分体时期、单核期、双核期等。花粉是有花粉母细胞经过减数分裂而形成的,因此花粉是单倍体的生殖细胞。 特点：小孢子四分体时期，4个单倍体细胞连在一起;单核期，又分单核居中期和单核靠边期，进入单核期时，四分体的4个单倍体细胞彼此分离，形成4个具有单细胞核的花粉粒，此时的细胞含有浓厚的细胞质，核位于细胞中央，即居中期，随着细胞不断长大，细胞核由中央移向细胞一侧