植物细胞工程操作技术实验准论文(组织培养).docVIP

木薯组织培养 木薯(Manihot esculenta crantz)广泛分布在全球热带和亚热带地区，具有全年可种植、易栽培、高度耐旱、病虫害较少、单产较高等优良特性。据统计，当前全球约有9O个国家栽培木薯，种植面积约1400万hm ，总产量约1．3亿t；木薯年贸易量约占总产量的1O 。我国主要在广西、广东、海南、云南、福建等省(自治区)种植。据2000年统计，全国木薯种植面积约43．7万hm，平均单产0．9t／hm ，其中广西种植27万hm ，广东近12．7万hm 。近年来，对木薯的组织培养及快速繁殖已进行较多研究。 1 材料与方法 1．1 试验材料 供试品种为两院栽培种，取木薯茎秆上着生的腋芽为外植体。 1．2 试验方法 1．2．1 培养基的配制 愈伤组织诱导培养基：MS+0.02mg／L GA3 +NAA 0．02mg／L. 1．2．2 无菌材料的获得 外植体表面消毒：田间采样后用洗洁精清洗1次，再用自来水冲净、凉干，切成芽段，每段带1个腋芽，无菌水冲冼2次； 0．1%升汞泡洗15～20min，无菌水冲洗4次，置于灭菌牛皮纸上凉干。 1．2．3 腋芽的诱导生长 用手术刀将木薯腋芽茎尖多余的部分切掉，一般外面接触了升汞的伤口都要切掉，然后接种到MS+0.02mg／L GA3 +NAA 0．02mg／L培养基中进行腋芽的诱导生长，每瓶一段芽段，接四瓶。 1．2．4 培养 将接种好的材料放置于培养室中进行培养，以日光灯为光源，光照强度2000lx，光周14h／d，温度为26土1℃。 2 结果 第一次接种的都污染了，但第二次接的诱导率很高，成功获得了愈伤组织。以木薯腋芽作为外植体，在MS+0.02mg／L GA3 +NAA 0．02mg／L培养基中可进行腋芽的诱导生长，但诱导率不高，与材料的选择有关。 表1、第一次木薯诱导培养结果 接种外植体数 诱导数 污染数 诱导率 污染率 4 0 4 0 100% 表2、第二次木薯诱导培养结果 接种外植体数 诱导数 污染数 诱导率 污染率 4 2 2 50% 50% 3 分析与讨论 污染率高的可能是因为取材的时间不合理，致使外植体表面带有大量的菌，进而导致外植体脱毒困难。因此，取材时要选择向阳的健壮的枝条并在天气晴朗时取材，而不宜在阴雨天取材。 木薯具有很高的经济价值和用途，发展木薯产业不但可促进养殖业的发展，还可促进化学工业的发展。以木薯为生产原料的产品很多，木薯淀粉可以制造食糖、味精以及啤酒、面包、粉丝、酱料等多种产品；此外，木薯也被认为是制备酒精最合理的原料；这些工业利用，为木薯的产销开辟了广阔的空间。本试验通过采用腋芽外植体配合激素进行芽诱导分化，成功诱导出木薯叶片。它具有诱导周期短、激素用量相对较少、操作比较方便的优点，为木薯新品种的快速繁殖推广缩短了年限。 柱花草组织培养 柱花草(Stylosanthes spp.)原产于中南美洲，是一种优良的热带豆科牧草，该属有44 个以上的种或亚种．由于柱花草炭疽病是威胁其推广种植的主要障碍，因而国内外近年来在柱花草种质资源的收集以培育抗病品种、引种选育、从体细胞变异和体细胞融合技术中获得抗炭疽病植株以及利用遗传工程获得抗病转基因植株等方面展开了多项工作，其中利用遗传工程获得抗病品种具有广阔的前景，而这一技术成功的关键又依赖于组织培养技术．虽然国外在20 世纪60 年代就开展了柱花草的组织培养研究，但由于所使用的基因型有限，因此取得的成果不显著．随着遗传工程技术的日益成熟，有希望通过该技术来培育更多更优良的柱花草品种．我们在借鉴前人工作的基础上，选用良好的柱花草品种、以叶片为外植体来研究柱花草组织培养技术，为建立成熟完善的柱花草组织培养体系奠定一定的理论和技术基础． 1 材料 供试品种为两院栽培种，取柱花草叶片为外植体。 2 试验方法 2．1 培养基的配制 愈伤组织诱导培养基：MS+4.0mg／L BA +NAA1mg／L; 丛生芽诱导培养基： MS+4.0mg/LBA+0.01mg/LNAA 2．2 无菌材料的获得 外植体表面消毒：将柱花草叶片洗净，然后将叶片放在牛皮纸上，用手术刀切取1cm长的叶片块（10片左右），置于0.1%的升汞溶液中消毒10-15min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。 2．3 愈伤组织及丛生芽的诱导 。用手术刀将叶片切成小片接种到MS+4.0mg／L BA +NAA1mg／L培养基中进行腋芽的诱导生长，每瓶两个芽，接四瓶。大约培养15d后可获得愈伤组织，将愈伤组织切成大小约0.5～1cm后转接到丛生芽诱导培养基中，放置于培养室中进行培养。 2．4 培养 将接种好的材料放置于培养室中进行培养，以日光灯为光源，光照强度2000lx，光周14h／