第十节血清乙型肝炎病毒前s1抗原(hbvpres1)检测sop(mysop-009hbvprs1.docVIP

第十节 血清乙型肝炎病毒前S1抗原（HBVPreS1）检测（MY/SOP-009） 1.目的 规范乙型肝炎病毒核心抗体检测试验，确保检测结果准确性和重复性。可用于临床辅助诊断是否感染乙型肝炎病毒。 2.原理 应用ELISA法原理检测人血清或血浆中的乙型肝炎病毒前S1抗原，用乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）包被微孔，配以辣根过氧化物酶标记的乙型肝炎病毒前S1（ PreS1）多克隆抗体，加入TMB显色液后显色，用来检测血清中的乙型肝炎病毒前S1抗原。 3. 标本：采集见采样手册。 3.1标本要求：用无抗凝剂管抽取静脉血2～3ml，1小时内送检，2小时内离心(2500～3000r/m)10分钟分离出血清。 3.2标本储存：一般标本应在2小时内完成检验，室温放置下不超过8小时，不能立即检测的标本应离心后4～8℃保存不超过48小时。超过48小时的标本应分离出血清于2～8℃的待检样本冰箱保存，一周内检测完毕。已完成检测的标本储存在废弃样本冰箱保存1周，以备复查。 3.3 拒收的标本包括 标本量过少；放置时间过久；申请单与标本上信息不一致；检验项目与标本类型不符；输液时在同侧血管抽血；标本溶血或严重脂血；标本污染；空的试管等。 4. 试剂 4.1试剂名称：乙型肝炎病毒前S1抗原检测试剂盒(96T)；酶结合物1瓶；TMB显色剂A、B各1瓶；浓缩洗涤液1瓶(1：20稀释)；终止液1瓶；阴性对照；阳性对照；子母袋；板贴。 4.4 试剂储存条件及有效期：储存温度为2～8℃，有效期为12个月，稳定期开封后的使用期限为7天（剩余包被条装入密封袋中保存）。 4.5性能参数 4.5.1灵敏度：用灵敏度企业参照品（L1、L2、L3）进行检测，结果应为阳性。 4.5.2 精密性：用精密性企业参考品进行检测，CV（%）15%（n=0）。 4.5.3其它因素的影响： 4.5.3.1 常见的干扰因素如溶血（血红素含量不高于500mg/L）、高血脂（甘油三酯含量不高于5.6mmol/L）、黄疸（胆红素含量不高于340ug/L）、类风湿因子和ALT升高均不会造成假阳性。 4.5.3.2 检测血清与三种常见的抗凝剂抗凝血浆标本，结果无差异。 4.5.3.3 本试剂与HAV-IgM、HEV、HCV和HIV抗体阳性样品均无交叉反应。 5. 仪器设备: Anthos 2010酶标分析仪。 6. 操作步骤.1 取出试剂盒及待测样品，将所有试剂及样品恢复至室温（18-25℃）。将恒温箱调至反应温度。 6.2 编号与加样：第1孔加阳性对照50μl，第2孔加阴性对照50μl，第3孔加低值质控50μl和第4孔加高值质控50μl，第5孔开始分别按序将样本50μl加入对应微孔。（注：用双波长检测，可不设空白对照孔；） 6.3 每孔加酶标结合物各50μl,振荡30s，使孔内液体混匀，用板贴封盖反应板,置 37℃温育 60 分钟。 6.4洗涤:小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤6次,扣干。 6.5 显色:每孔加入TMB显色剂A、B各50μl,轻轻振荡混匀,置 37℃避光显色 10～15分钟。 6.6 加终止液:每孔加终止液 50μl，轻轻振荡混匀。 6.7 测定：用酶标仪双波长450nm/测定各孔OD值。 7.1 CUT OFF值=阴性对照孔OD值×2.5。（阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算；高于0.05，按实际值计算。） 7.2 待测样品OD值样品OD值 8. 质量控制： 8.1 质控物来源: 上海复星长征医学科学有限公司。 8.2 贮存条件和稳定期：2～8℃贮存，效期12个月。 8.3 室内质量控制和外部质量评价程序：见程序性文件。 9.生物参考区间：阴性不同品名、不同批号的试剂不可混用，取出当天所需微孔条后，其余微孔条封口膜封存以避免受潮。加试剂前应使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。垂直滴加。勿滴在孔壁上。12.3温育时间一定要够。 12.4洗板要充分；防溢出，防污染。 12.5拍板时应注意微孔掉落及多余液体洒溅。 13．操作中可能的风险与安全措施（见第一节） 14. 临床意义可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。16. 参考文献