几丁质酶基因在烟草栽培品种中的表达.PDFVIP

　　中国烟草科学　　1997, (4) : 47—50　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 几丁质酶基因在烟草栽培品种中的表达 时　焦 中国农业科学院烟草研究所 　山东青州 262500 中国烟草总公司青州烟草研究所 J I Coop er (病毒和环境微生物研究所　英国牛津) 　　摘　要　利用多聚酶链式反应(PCR ) 对来源于一种生物杀虫剂(bacu loviru s) 的几丁质酶基因 进行体外扩增, 并插入载体质粒 2 中, 然后转化大肠杆菌( ) 1 。用重组 pRO K E scherich ia coli XL B lue 质粒 转化植物转基因载体——土壤农杆菌( ) 4404 菌 pRO K 2 DNA A g robacteria tum ef aciens LBA 株。借助于土壤农杆菌侵染烟草叶圆片, 将目的基因导入。通过组织培养诱导生芽和生根, 获得烟 草再生植株。利用含卡那霉素的培养基对再生烟株进行初步筛选。进一步PCR 和W estern 印迹检 测结果表明: 转基因烟草中有几丁质酶基因和蛋白的表达。初步检测结果表明: 转基因烟草具有较 高的几丁质酶活性。 主题词　烟草　几丁质酶　基因　表达 　　人们发现植物细胞中许多基因对病原真菌的侵 克散锡是植物基因工程极易操作的材料。目前尚无 染能立即做出反应, 这类基因包括结构蛋白和酶基 将几丁质酶基因转入烤烟品种的报道, 并且我国尚 [ 8 ] 无将几丁质酶基因导入作物的成功报道[ 18 ]。 因等 。酶能促进抗真菌的次生代谢产物以及病原 有关的蛋白质(P r) 的合成[ 3, 11, 17 ]。当生物因子如病 不同几丁质酶对几丁质的分解活性不同, 来源 原物和非生物因子对植物造成不良影响时, 多种病 于 bacu loviru s 的几丁质酶能够在体外和体内水解 原有关蛋白对这些生物和非生物压力迅速反应, 并 几丁质。本研究的主要目的是将来源于bacu loviru s 在植物细胞中大量积累。一些病原有关的蛋白质, 如 的几丁质酶基因首次转入栽培作物中。 几丁质酶和 1, 3 葡聚糖酶具有水解活性[ 6, 12 ]。提 1　材料与方法 纯的几丁质酶在体外能分解真菌的细胞壁, 同时也 [ 2 ] ( ) 是细菌的溶菌酶 。几丁质 聚乙酰氨基葡糖 是许 11　几丁质酶基因的克隆与转化 多真菌细胞壁的组成成分, 几丁质酶以能分解真菌 利用多聚酶链式反应(Po lym erase Chain R eac [ 5 ] ) 细胞壁的几丁质而产生对真菌病害的抗性 。此外,