抗人分化抑制因子3蛋白单克隆抗体的制备和鉴定.pdfVIP

· 920 · 医学研究生学报 2010年9月第 23卷 第 9期 JMedPostgra，Vo1．23，No．9。Seotember．2010 论 著 (基础研究) 抗人分化抑制因子 3蛋 白单克隆抗体的制备和鉴定 仲爱芳，李晓军，贾 丽，陈芳芳，虞 伟 [摘要】 目的 分化抑制因子3(inhibitorofdifferentiation3，Id3)是重要的细胞生长调控分子，在细胞增殖 、分化等过程 中发挥重要作用。文中探讨在大肠杆菌中表达及纯化重组人 Id3蛋白，制备抗人 Id3单克隆抗体 (MeAb)，以进一步研究Id_3 的生物学功能及其临床应用。 方法 将重组表达载体 Id3／pET32a转化大肠杆菌BL21(DE3)，用异丙基 B—D硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导转化菌表达 Id3重组融合蛋白(Trx—His—hid3)，通过镍亲和层析柱纯化Trx．His．hid3。以纯化的Id3重组蛋白为免 疫原，免疫 BALB／e小鼠，采用杂交瘤技术制备 Id3McAb，应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)及Westernblot进行抗体鉴定。 结果 经免疫小鼠、脾细胞分离、细胞融合及克隆筛选等步骤，筛选出2株分泌抗人 Id3McAb的杂交瘤细胞株，分别命名为 McAb6G7和6G9，免疫球蛋 白亚类鉴定均为 lgG1亚类。Westernblot分析表明，McAb6G7和6G9能与重组人 Id3蛋白特异性 结合。间接 ELISA法检测 2株细胞冻融前后所产生上清中的抗体效价均分别为 1：1000、I：5000。 结论 成功制备了抗人 Id3McAb，为研究该蛋 白的功能提供了有利工具。 [关键词】 分化抑制因子3；单克隆抗体；免疫印迹 【中图分类号】 Q819 【文献标志码】 A [文章编号】 1008—8199(2010)09-0920-04 PreparationandidentificationofmonoclonalantibodyagainsthumanId3 ZHONGAi—fang一，LIXiao-jun，JIALi，CHENFang．fang，YUWei (1．P ResearchInstituteofClinicalLaboratoryMedicine．NanfingGeneralHospitalofNanjingMilitaryCorn— mand，Nanjing210002，Jiangsu，China；2．DepartmentofClinicalLaboratory，No．102HospitalofP ，Chang— zhou213003，Jiangsu，China) [Abstracts】 0bjective Theinhibitorofdifferentiation3(Id3)，asanimportantcellgrowthregulator，playsasignificantrole incellproliferationanddifferentiation．ThisstudyaimedtoexpressandpurifytherecombinanthumanId3proteininEcoliandprepare amonoclonalantibody(McAb)againsthumanId3forfurtherinvestigatingthebiologicalfunctionandclinicalapplicationofId3． Methods TherecombinantvectorId3／pET32awastransformedintoEcoliBI21andrecombinanthumanId3wasexpressedafterin— ductionwithIPTG．TheId3fusionproteinwaspurifiedthroughimmobilizedNi“absorptionchromatographiccolumnandusedtoim- munizeBALB／cnlice．TheMcAbwasproducedbytheconventionalhybridomacellmethodandcharacterizedbyELISA andWestern blot． Results Twohybridomacells，named6G7and6G9，wereobtainedafter3—4roundsofcloning，whichcouldstablysecrete McA