抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP－2对小鼠溃疡性结肠炎肠黏膜细胞因子表达的影响.pdfVIP

· 2392· 广东医学 2012年8月第33卷第 l6期 GuangdongMedicalJournal Aug．2012，Vo1．33，No．16 抗小 鼠TLR2胞外段单表位抗体 TSP一2对小鼠 溃疡性结肠炎肠黏膜细胞因子表达的影响木 魏铖 ，王立生 ，王建尧 ，张茹 ，师瑞月 ，姚君 暨南大学第二临床医学院、广东省深圳市人民医院消化内科(518020)；广东省深圳市儿童医院普外科(518020) 摘【要】 目的 观察抗小鼠1’01l样受体2(rI101l—likereceptor2)胞外段单表位抗体TSP一2对溃疡性结肠炎小 鼠肠黏膜细胞因子表达的影响。方法 采用硫酸葡聚糖钠(cHNazO，S，，DSS)制备溃疡性结肠炎小鼠模型，将实 验小鼠随机分成4组：正常对照(NC)组、模型(MD)组、TSP一2治疗组和正常兔IgG治疗组；除NC组外，其他组均给 予5％DSS造模7d后停用造模药，TSP一2治疗组和正常兔 IgG治疗组给予相应药物后续干预治疗7d。记录分析 疾病活动指数 (DAI)，14d后处死小鼠，取结肠行HE染色；实时荧光定量RT—PCR法检测白细胞介素(IL)～l0、肿 瘤坏死因子一Ot(TNF一仅)、IL一6和 IL一1BmRNA的表达，ELISA法测小鼠肠黏膜 IL一10、IL一6、IL一1B和TNF一0【 蛋白水平，并进行统计学分析。结果 P一2治疗组小鼠第 10一l4天DAI明显低于MD组 (P0．05)；TSP一2治 疗组肠黏膜 IL—10mRNA和蛋白的表达量均明显高于MD组(P0．05)；同时TSP一2治疗组肠黏膜TNF— 、IL一6 和 IL—lBmRNA和蛋白的表达量均明显低于MD组(P0．05)；正常兔 IgG治疗组与MD组比较，细胞因子检测数 据差异均无统计学意义(P0．05)。结论 11sP一2可以提高抗炎细胞因子 IL—l0的水平并降低致炎细胞 因子 TNF— 、IL一6和 IL—lB的水平，通过抗炎和降低肠道过度的免疫反应，对溃疡性结肠炎发挥治疗作用。 【关键词】 溃疡性结肠炎；TSP一2；细胞因子 溃疡性结肠炎 (ulcerativecolitis，UC)是一种累及 DSS，分子量5ooo)购于广州齐云生物科技有限公司。 机体结肠和直肠的非特异性慢性复发性炎症性疾病 ， 核蛋白抽提试剂盒购 自Ferrnantas公司。白细胞介素 病因尚未明确，研究”认为本病与遗传、感染、免疫、环 (IL)一10、IL一6、IL一1B和肿瘤坏死因子 一0l(TNF一 境以及肠道微生态失衡等多因素以及相互作用均有重 0)【ELISA试剂盒 (RDsystems)均购于 RD公司，组 要的关系。UC病变早期可见结肠黏膜的弥漫性炎症 织 RNA提取、RT反转录和荧光定量 PCR试剂盒均购 反应 ，黏膜的充血及水肿，严重者可见灶性出血、组织 自宝生物工程 (大连)有限公司，BCA蛋白定量试剂盒 变脆、触之易出血；急性期可见淋巴细胞、嗜酸及中性 购 自上海 申能博彩生物公司。 粒等免疫细胞浸润 。细胞因子在肠道黏膜免疫系统 1．2 方法 中起着非常关键的信号传导作用，参与肠道免疫系统 1．2．1 模型制备与药物治疗 将实验小鼠随机分成4 的调控，与 uC的发生、发展、预后均有重要的关系 。 组，每组 10只：正常对照 (NC)组、模型 (MD)组、TSP一2 研究 认为，抗小鼠Toll样受体2(Toll—likereceptor 治疗组和正常兔 IgG治疗组。NC组小鼠饮用蒸馏水 14 2，TLR2)胞外段单表位抗体 TSP一2具有抗炎、抗过 d，MD组、TSP一2治疗组和正常兔 IgG治疗组饮用5％ 敏、调节免疫等作用，并对腹膜炎、气道炎症有缓解作 DSS蒸馏水7d制备 UC模型，然后饮用水换为无 DSS 用。2010年8月至2011年 10月，本实验拟研究抗小 的蒸馏水再连续7d，共 14d。造模 7d后，NC组和MD 鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP一2对 UC的免疫调节 组腹腔注射等量生理盐水，TSP一2治疗组和正常兔 IgG 与治疗作用。 治疗组每天分别注射TSP一2(2．5ms