成骨细胞复合原位成型磷酸钙骨水泥的细胞学研究.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) Vo1．43 No．1 Feb．2011 ·67 · · 论 著 · 成骨细胞复合原位成型磷酸钙骨水泥的 细胞学研究 张 洲 ，乔朋艳 ，肖军军 ，董利 民 ，谢秋菲 ，徐 韬 (1．北京大学 口腔医学院 ·口腔医院修复科 ，北京 100081；2．北京大学基础医学院细胞生物学系，北京100191； 3．清华大学核能与新能源技术研究院，精细陶瓷北京市重点实验 ，北京 100084；4．北京大学 口腔医学院 ·口腔 医院预防科，北京 100081) [摘 要]目的：通过体外细胞培养实验，观察分析壳聚糖微球／磷酸钙骨水泥、p一磷酸三钙 (B—tricalciumphosphate， ~-TCP)／磷酸钙骨水泥、含钾磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞的影响以及固化后 10d细胞的生物活性变 化。方法：首先以兔的骨髓为组织来源，采用密度梯度分离法和贴壁分离法分离培养原代兔骨髓基质细胞 (rabbit ma~owstromalcell，rMSC)，通过流式细胞分析和分选得到成分比较单一的兔骨髓基质细胞，经过体外诱导得到兔 成骨细胞 ，用茜素红染色法验证其成骨功能。将rMSC分别与上述3种骨水泥固化块及其浆料复合培养，空白对照 组是直接在24孔板上接种细胞 ，每组4个样本。在复合培养的第 1…4710天，通过酸性磷酸酶(acidphosphatase assay，APA)和碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase，ALP)活性测定 ，检测细胞 的增殖和分化能力；吖啶橙 (acridineor． ange，AO)染色后荧光显微镜观察，对细胞进行计数并分析。环境扫描电子显微镜观察细胞在材料表面的生长、黏 附状况。各组结果进行双因素方差分析，用LSD法进行组问比较。结果：3种骨水泥浆料在固化过程中均对 rMSC 有较大影响，细胞的增殖活性 (复合培养第 1O天APA活性浆料组吸光度平均值分别为0．049，0．050，0．049；固化块 组分别为0．898，0．867，0．909；P0．001)和分化能力 (复合培养第 10天 ALP活性浆料组平均值分别为0．775， 0．782，0．798U／gprotein；固化块组分别为49．288，49．631，49．744U／gprotein；P0．001)均明显低于固化块组， 细胞数 目也明显减少(复合培养第 10天细胞数 目每视野平均为3．7，3．7，3．7个 ；固化块组分别为91．1，89．7，93．7 个，P0．001)，且这种影响是不可恢复的；rMSC在 3种骨水泥的固化块上能较好地黏附，细胞数 目、增殖和分化能 力基本不受影响。结论：可注射性磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞有较大的影响，用成骨细胞复合浆料前 需对细胞采取保护措施。 [关键词]成骨细胞；磷酸钙类；骨代用品 [中图分类号]R68 [文献标志码]A [文章编号]1671—167X(2011)O1-0067-06 doi：10．3969／j．issn．1671—167X．2011．01．015 Cytologicalstudyonosteoblastsandin-situsettingcalcium phosphatecements ZHANGZhou ，QIAOPeng—yan，XIAOJun-jun，DONGLi．min，XIEQiu—fei ，XUTao (1．DepartmentofProsthodontics，PekingUniversitySchoolandHospitalofStomatology，Beijing100081，China；2．Labo— ratoryofCellsandBiology，PekingUniversitySchoolofBasicMedicalScience，Beijing100191，China；3．BeijingKeyLab ofFineCeramics，InstituteofNuclearandNewEnerygTechnoloyg，TsinghHaUniversity，Eneryg ScienceBuilding，Beijing 100084，China；4．DepartmentofPreventiveDen