必须注意沙门氏菌鉴定中假阳性问题.docVIP

必须注意沙门氏菌鉴定中假阳性问题在全球各地的食物中毒事件中，沙门氏菌食品中毒经常占第一位或第二位。沙门氏菌菌型繁多，已确认的沙门氏菌有两千多血型。因此，沙门氏菌的检测鉴定一直是沙门氏菌研究的主要问题。 沙门氏菌鉴定根据生化特性归属，按照血清学鉴定到菌型，一般不难作出正确判断。但日常工作中我们常遇到一些菌株个别生化发生变异，加上菌属间抗原关系交叉常使菌种鉴定工作陷入迷途。如处理不当，一方面可能把新的菌型和生化变种漏检；另一方面作出沙门氏菌假阳性报告，这些情况常使我们感到困扰。如何解决沙门氏菌鉴定中假阳性问题，对于基层单位工作者具有重要意义。 我们检验沙门氏菌常从SS平板上挑无色半透明中等大小或中心有黑点的菌落接种双管糖初筛（上海市防疫站产的肠杆菌科细菌综合发酵管），凡葡萄糖产酸、甘露醇阳性、尿素阴性、蔗糖阴性、硫化氢阳性、靛基质阴性、动力阳性的典型生化株用沙门氏菌A-F多价诊断血清凝集后再种普通琼脂斜面复核。对于普琼上的培养物也能与沙门氏菌A-F多价血清凝集的菌株报告沙门氏菌阳性。但工作中我们发现有一部分菌株从双糖管上挑的培养物能与沙门氏菌A-F多价血清凝集，然后再转种到普琼上就不发生凝集了，我们称这部分菌株为“酸凝集株”，后经进一步鉴定为艾希氏菌属。我们还发现另一部分菌株普琼培养物也能与沙门氏菌A-F多价血清发生凝集，且查出O抗原，但进一步做生化发现个别生化不典型，如蔗糖发酵株、靛基质阳性株，我们称这部分菌株为“交叉凝集株”，后经证实为柠檬酸杆菌或艾希氏菌。 一、酸凝集株 这部分菌株能发酵葡萄糖产酸，我们测得糖斜面上pH为4.5~5.0左右，接近或达到细菌的等电点。虽然从糖管上挑出来的培养物到了血清凝集时细菌所处的环境pH已达7.0左右。但也改变不了细菌抗原在酸中经过处理产生的自凝现象造成酸凝集。象这样的菌株，如果只根据双管糖生化反应符合就用沙门氏菌多价血清凝集，这样搞错的可能性很大。因此，我们一定要避开糖的环境，凡初筛生化符合沙门氏菌的先不要急于从糖斜面上挑培养物来做凝集试验。应当转种一支普通琼脂斜面，用普琼斜面上的培养物检查沙门氏菌的抗原就可以区分究竟是沙门氏菌还是艾希氏菌属了。 二、交叉凝集株 用血清学方法检查沙门氏菌O抗原常发现许多柠檬酸杆菌。大肠艾希氏菌与沙门氏菌O血清发生交叉凝集反应。这是因为他们的特异性侧链的末端基因与某些沙门氏菌相同，他们之间的O抗原关系有的部分相同，有的甚至完全一样。如果在鉴定中忽略了几项重要生化，只根据能被沙门氏菌A-F多价血清凝集就发报告。由于菌属间的抗原交叉，常造成误判沙门氏菌的情况也是很严重的。工作中常见的有蔗糖发酵株，靛基质阳性株。 1.蔗糖发酵株 沙门氏菌对蔗糖一般均不发酵。但也有发酵蔗糖的变种，如鸭沙门氏菌，山夫登堡沙门氏菌等，这是少见的。大量的蔗糖发酵株并不是沙门氏菌。我们曾经查40多株蔗糖发酵株，他们与沙门氏菌A-F多价血清凝集很好，也能查出O抗原，但后来进一步做噬菌体和重要生化证实为枸椽杆菌。看来柠檬酸杆菌与沙门氏菌抗原交叉相当严重。何晓青主任技师查187株枸椽杆菌有20%的菌株可与沙门氏菌A-F多价血清发生凝集反应，有50%的菌株可与沙门氏菌O1-O60发生凝集反应。上海食品卫生监督检验所报告210株沙门氏菌中，真正的沙门氏菌只有136株，柠檬酸杆菌74株，占1/3多。而对于菌属间的抗原交叉问题目前制备的沙门氏菌因子血清暂无办法克服。 对于这些菌究竟是柠檬酸杆菌还是发酵蔗糖的沙门氏菌变种，我们可以通过以下方法鉴别： 1.1用肠杆菌科分属诊断噬菌体检查，既准确又简便。凡是能被C裂介的判柠檬酸杆菌，凡能被O-I裂介的判沙门氏菌。这是因为沙门氏菌O-I噬菌体具有属的特异性。实践证明这套噬菌体可以快速诊断肠杆菌科四个菌属90%以上的菌株。判定结果阳性可靠率达99%以上，使需要做生化鉴定的菌株下降到10%以下，属外交叉反应极低。 1.2用几项重要生化区别 虽然沙门氏菌与柠檬酸菌生化大多相同，但仍可用下列生化区别之见表1 以上如果三项试验中有一项异常仍可判沙门氏菌见表2。 2.靛基质阳性株 沙门氏菌大多数靛基质阴性，但也有沙门氏菌靛基质阳性变种，这也是少数。我们在工作中常遇到一些靛基质阳性株，实际为艾希氏菌属。这些菌株与沙门氏菌也有共同抗原，因而与沙门氏菌诊断血清凝集也很好。究竟是什么菌，也可以采取以下办法来区别： 2.1用肠杆菌科诊断噬菌体检查。凡是能被E、CE、E-4裂介的判艾希氏菌。凡能被0-I裂介的判沙门氏菌。 2.2用几项生化区别。见表3 按照上述生化沙门氏菌大多数为+ + -，艾希氏菌-+。 2.3要求血清学结果 对于靛基质阳性的菌株，加做甘露醇、山梨醇，如二醇同时阳性。，进一步用血清学鉴定。