植物组织培养（附照片）.ppt

《植物组织培养学》实验 宜春学院生命科学与资源环境学院 园林教研室 杨育红 园艺教研室 卢其能 却志群 实验一 植物组织培养实验室参观 一、目的要求 通过本次实验，使学生掌握如何组建植物组织培养实验室；同时熟悉组培中涉及的各种仪器设备和器皿用具的使用方法。 二、仪器用具 组培室内的各种实验设备。 三、实验内容 1．介绍合理的组培室布局 2．介绍实验设备和用具 3．介绍实验的操作规程。 四、作业 将本此实训内容整理成实验报告。 每人设计一个植物组织培养室的组建方案。（说明设计思路） 实验二 MS培养基母液的配制与保存 一、目的要求 通过MS培养基的母液配制和保存,掌握配制和保存培养基母液的基本技能. 二、材料与用具 1 所需仪器及设备：天平、烧杯、定容瓶、量筒、蒸馏水、母液瓶、标签、冰箱等。 2 所需药品及试剂：配制MS培养基所需的药品、生长调节物质、蒸馏水、95%酒精、0.1mol/l的NaOH、0.1mol/l的HCl 三、方法步骤 1．母液的配制 根据MS培养基配方表配制六种母液。（详见附表） 2．母液的保存 （1）装瓶：将配制好的母液分别倒入瓶中，瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、吸取量与配制日期。 （2）储藏：将母液瓶储放在冰箱内备用。 四、作业 1．整理实验报告。 2．列一张配制MS培养基母液成分表。 配制MS培养基母液成分表 实验三 MS固体培养基的配制 一 目的要求 通过 MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。 二 材料与用具 1 所需仪器及设备：电炉、酸度计、高压湿热灭菌器 2 所需药品及试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、 0.1mol/l NaOH、0.1mol/l Hcl 、琼脂、蔗糖、蒸馏水 3 其他材料：移液管、量筒、定容瓶、培养瓶、标签、铅笔。 三 方法步骤 1．按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸馏水的量筒 母液一 20ml 母液二 10ml 母液三 10ml 母液四 10ml 母液五 20ml 母液六 5ml 2．加入生长调节物质： 适配制的培养基而定。 3．加入蔗糖：30g/l 4．加蒸馏水定容后倒入锅中 5．加入琼脂：6.5g/l（视琼脂质量而定）,后调节PH值(用1mol/l的NaOH或1mol/l的HCL) 6.熔化琼脂: 在电炉上加热溶液,并不断搅拌,使琼脂熔化. 7.培养基的分装 四、作业 1．整理实验报告 注：（1）配制培养基时母液吸取量的计算： 吸取量（ml）=（培养基中某成分的规定浓度（mg/l）*配制培养基的体积（l））/母液中某成分浓度（mg/l） （2）植物激素母液吸取量计算： 吸取母液量（ml）=（培养基中激素浓度（mg/l）*配制培养基体积（l））/激素母液浓度（mg/ml） 实验四 愈伤组织的诱导 一、目的要求 本次试验，首先通过在无菌操作台上进行无菌操作训练，使学生初步掌握组织培养的无菌操作技术。其次，通过本次实验是了解并掌握愈伤组织诱导的基本程序和方法。 二 材料与用具 1 所需仪器及工具：超净工作台、70%酒精、95%酒精、接种器械（主要指剪刀、镊子等）、培养材料或外植体、0.1%的升汞、无菌水等。 2 愈伤组织诱导培养基： MS+2.4-D1.0+KT0.2 或B5+2.4-D1.0+KT0.2 三、方法步骤 1．进入实验室后用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子、鞋子。 2．打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌操作室内的紫外灯，照射20分钟（进行紫外灭菌） 3．进行外植体预处理（即对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。） 4．照射20分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用70%的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消毒和接种工作。 5．用蘸有70%的酒精的纱布擦拭装有培养基的培养瓶，放进工作台。 6．把接种器械浸泡在95%酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上。 7．胡萝卜种子经75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2遍，再用0.1%升汞浸泡10分钟，无菌水冲洗3-5次后，接种于不含任何激素的1/2MS固体培养基含（1.5%蔗糖）上，于24℃暗培养条件下萌发7-10天后，将子叶和下胚轴切成0.5cm的截段作为组织培养的材料。 8.进行接种。 9.接种完毕后,清理和关闭超净工作台,并将培养瓶放入培养室培养。 四、作业 1.整理实验报告。 2.接种一周后,观察接种材料的污染情况,并分析污染原因。 3.25天后统计愈伤组织的诱导率，记录实验现象。 实验五 月季茎段