波动和恒定的葡萄糖浓度对大鼠肾小球系膜细胞TRPC6和TRPC1表达的影响.pdfVIP

广东医学 2012年5月 第 33卷第 10期 GuangdongMedicalJourn~ May．2012，Vo1．33，No．10 · 1385 · 波动和恒定的葡萄糖浓度对大 鼠肾小球系膜 细胞 TRPC6和 TRPC1表达 的影响 高红红 ，李青菊 ，申素峰 郑州大学第二附属医院内分泌科 (郑州450014)；郑州大学第五附属医院麻醉科(郑州450052) 摘【要】 目的 研究波动和恒定的葡萄糖浓度对体外培养的大鼠肾小球 系膜细胞(GMC)瞬时受体势TR— PC6和TRPC1表达的影响，探讨糖尿病肾病的发病机制。方法 将体外培养的各组系膜细胞分别在波动和恒定 葡萄糖浓度中分别培养24、48、72h后 ，进行细胞学形态结构观察，MTF法测定细胞存活率，RT—PCR检测细胞 TRPC6和TRPC1特异性条带灰度的表达情况。结果 波动血糖组在TRPC6基因的表达较恒定高糖组差异有统 计学意义 (P0．01)。结论 波动葡萄糖浓度对 GMC的损伤以及促进细胞凋亡方面较恒定葡糖糖浓度更严重， 是导致糖尿病 肾病发生和发展 的原因之一 。 【关键词】 肾小球系膜细胞；瞬时受体势；糖尿病肾病；波动的葡萄糖浓度；恒定的葡萄糖浓度 糖尿病肾病是糖尿病患者重要的并发症之一以及 1．3 实验分组 共 3组：(1)正常对照组：5．6mmo~L 死亡的主要原因。肾小球系膜细胞 (GMC)是肾小球 葡萄糖的DMEM培养基 中培养 ；(2)恒定高糖组 ：25 中最活跃的反应性细胞 ，与糖尿病肾病早期肾小球高 mmo~L葡萄糖的DMEM培养基中培养；(3)波动血糖 滤过、中晚期细胞外基质增多、肾小球基底膜增厚和肾 组 ：细胞先用25mmo~L葡萄糖的DMEM培养基中培 小球硬化有密切关系，可见其病理变化在糖尿病肾病 养2h，再用 5．6mmo~L葡萄糖的DMEM培养基中培 的发生和发展中居于重要地位。瞬时受体势(transient 养3h，每天重复3次，然后将细胞置于5．6mmo~L葡 receptorpotential，TRP)是一种新发现的细胞膜上的阳 萄糖的DMEM培养基中培养过夜。 离子通道，主要通过 的离子为 ca“，瞬时受体 势 C 1．4 指标测定 (1)细胞形态学观察和检测：细胞经 (transientreceptorpotentialcanonical，TRPC)是 TRP家 处理24、48、72h后，分别置于倒置显微镜下进行细胞 族主要成员之一 ，为传统型TRP，包括7个亚族，即TR— 形态学观察并用MrITI法测定细胞成活率。(2)RT— PC1～7。目前研究表 明，TRPC6与肾脏疾病有关，主 PCR法检测细胞 TRPC6mRNA和TRPC1mRNA表达 要是在足细胞方面，与局灶性节段性肾小球硬化和蛋 水平 ，以提取的总mRNA为模板 ，加入反转录反应液， 白尿等密切相关，其与 GMC关系的研究较少见 ，特别 将 mRNA逆转录为cDNA，进行 PCR反应。TRPC6上 在 Ca 水平研究糖尿病肾病方面。为此，2009年 9月 游引物为 5一AGTGAAATTCCTCGTGGTCCT一3，下游 至2011年 l2月，本研究通过对不 同浓度葡萄糖对大 引物为5一GcTGGTI]rCA1丫rAGGGAGGAG一3，产物长 鼠GMC增殖的影响以及瞬时受体势TRPC6和TRPC1 度是 217bp；TRPC1上 游 引物 为 5 一TGGTAT— 表达的影响，探究糖尿病肾病的病理损伤机制。 GAAGGGTTGGAAGACT一3，下 游 引 物 为 5 一 1 材料与方法 GAAGAGCcGAAGGTAAcTCAGA一3，产物长度是 216 bp；大鼠内参 B—actin上游引物为5一TGCGGAAG— 1．1 细胞和试剂 大鼠GMC(HBZY一1)购 自武汉博 GATCATYAACGGA 一3，下游 引物为 5 一AGTAG· 士德公司，低糖型和高糖型DMEM培养基购 自美国