流体切应力作用下破骨细胞组织蛋白酶K的表达.pdfVIP

实用 口腔医学杂志(JPractStomato1)2013Jul，29(4) ·459· 流体切应力作用下破骨细胞组织蛋 白酶 K的表达 董强 夏茜 周建奖 马洪 王永 廖健 梁星 【摘要】 目的：研究流体切应力作用下大鼠破骨细胞组织蛋白酶K(CatK)mRNA的表达变化。方法：1，25一(OH)：D，／地塞 米松联合诱导sD大鼠骨髓细胞，抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、甲苯胺蓝染色和扫描电镜观察鉴定破骨细胞 ，0．25％胰 蛋 白酶／0．02％EDTA进行细胞纯化。对纯化后的破骨细胞施加不 同力值和作用时间的流体切应力 ，实时荧光定量巢式 RT—PCR检测CatKmRNA的表达。结果：随着力值的增加 (0．9～18．7dyne／cm )和作用时间的延长 (15～60min)，破骨细胞 组 CatKmRNA的表达量分别呈下降趋势 (P0．05)。结论 ：大鼠破骨细胞CatKmRNA的表达水平与一定范围的流体切应 力力值的大小和加载时间呈负相关。 【关键词】破骨细胞；流体切应力；组织蛋 白酶K Theexpression ofcathepsinsK inculturedosteoelastsafterfluidshearstressstimulatiOn DONGQiang，XIAQian，ZHOUJianjiang ，MA ，WANG ，LIAOJian，LIANGXing．1．550004， DepartmentofStomatology，TheAffiliatedHospitalofGuiyangMedicalCollege，China；2．KeyLaboratoryofMedi— calMolecularBiologyofGuizhouProvince，Guiyang；3．DepartmentofProsthodontics，耽 ChinaCollegeofStoma— tology。SichuanUniversity，Chengdu 【Abstract】Objective：TostudyeathepsinsK(CatK)mRNAexpressioninosteoclastsstimulatedbyfluidshearstress．Methods： ThebonemarrowcellsofSDratswereculturedwiththepresenceof1，25·(OH)2D3anddexamethasone，theosteoclast—likecellswere identifiedbytartrate—resistantacidphosphatase(TRAP)staining，toluidinebluestainingandSEMobservation，thenpurifiedwithtryp- sin／EDTA．Differentvaluesandlastingtimeofsteadyfluidshearstresswereexertedontheosteoclastsbyaparallelplateflow system． CatK expressionofosteoclastswasdetectedbyreahimeRT—PCR andnestedPCR．Results：ThelevelsofCatKmRNA weredown— regulatedwiththeincreaseofstressvMue(0．9～18．7dyne／em )andexposuretime(15—60min)(P0．05)．Conclusion：Acer— tainrangeofsteadyfluidshera stressmaydown —reuglatetheexpressionofCatK inosteoclastsstrength—and—time-dependently． 【Keywords】 Osteoclast；Fluidshearstress；CathepsinsK 中图分类号 ：R318．01 文献标志码 ：A doi：10．3969／j．issn．1001—3733．2013．04．001 骨组织的改建受到激素和机械信号的调控。内环 K)是破骨细胞中特征性高表达的溶酶体酶，在骨基质 境的稳定主要通过激素调节，而功能性应变下发生的 的降解和改建中发挥关键作用…。本研究对纯化后 局部骨改建则维持着骨组织结构的完整性。研究骨细