第六酶工 程制药.pptVIP

第六章 酶工程制药 第一节、酶工程简介 酶工程是酶学和工程学相互渗透结合发展而形成一门新的技术学科。它是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能，并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 酶工程的研究内容 酶的分离、提纯、大批量生产及应用开发。 酶和细胞的固定化及酶反应器的研究。 酶生产中基因工程技术的应用及遗传修饰酶的研究。 酶的分子改造与化学修饰以及酶的结构与功能之间关系的研究。 有机相中酶反应的研究。 酶的抑制剂、激活剂的开发及应用研究。 抗体酶、核酸酶的研究。 模拟酶、合成酶及酶分子的人工设计、合成的研究。 二、酶的来源 提取分离法：动物、植物组织、器官、细胞 生物合成法：动物、植物、微生物细胞 化学合成法：实验室阶段，尚不成熟 微生物发酵生产酶的优势 1、微生物种类多，酶的品种齐全； 2、微生物繁殖快，生长周期短，产量高； 3、微生物培养方法简单，原料来源丰富，价格低廉，产量高，经济效益高； 4、微生物具有较强的适应性和应变能力，菌种易诱变，易于控制代谢方向； 三、酶生产菌 （1）繁殖快，产酶量高，酶的性质应符合使用要求，最好是产胞外酶； （2）不是致病菌，不产生毒素以及其他生理活性物质。 （3）产酶性能稳定，不易变异、退化，不易感染噬菌体； 产生的酶便于分离，容易提纯，收得率高； （4）容易培养，能利用廉价的原料，发酵周期短； 2、生产菌的来源3、目前常用的产酶微生物 大肠杆菌 生产谷氨酸脱羧酶用于测定谷氨酸含量 生产天冬氨酸酶催化延胡索酸生成L-天冬氨酸 生产苄青霉素酰化酶生成新的半合成青霉素或头孢菌素类 生产β-半乳糖苷酶用于分解乳糖 枯草芽孢杆菌 生产α -淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酯酶 青霉菌 生产葡萄糖氧化酶、青霉素酰化酶等 链霉菌 生产青霉素酰化酶、葡萄糖异构酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、羟化酶等 啤酒酵母 其他 四、酶在医药领域的应用 第二节 酶和细胞的固定化 一、固定化酶的制备 ⒈固定化酶的定义： 固定化酶是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。 ⒉固定化酶的特点 具有生物催化剂的功能，又有固相催化剂的功能。 优点： ①可多次使用 ②反应后，酶底物产物易分开，产物中无残留酶，易纯化，产品质量高。 ③反应条件易控制。 ④酶的利用效率高。 ⑤比水溶性酶更适合于多酶反应。 缺点： ①酶的活力有损失 ②增加生产成本 ③只能用于可溶性底物，且较适用于小分子底物 ④胞内酶必须经过酶的分离纯化 ⑤与完整菌体相比不适宜于多酶反应。 ⒊酶的固定化方法与制备技术 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） ⑴载体结合法 ①物理吸附法 ②离子结合法 ③共价结合法 ⑵交联法 ⑶包埋法 ①网格型 ②微囊型 ⑷选择性热变性法 ⒋酶和细胞的固定化载体 ⑴吸附载体 ⑵包埋载体 ⑶交联载体 表6-1 二、固定化细胞的制备 ⒈固定化细胞的定义 将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术。 被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞。 ⒉固定化细胞的特点 有细胞特性，生物催化剂功能，固相催化剂特点。 优点： ①无须进行酶的分离纯化 ②保持酶的原始状态，酶回收率高 ③比固定化酶稳定性高 ④细胞内酶附助因子可再生 ⑤细胞本身含多酶体系 ⑥抗污染能力强 局限性： ①仅利用胞内酶，会形成无用的副产物 ②细胞膜、细胞壁和载体都存在扩散限制作用 ③载体形成的空隙大小影响分子底物的通透性 ⒊固定化细胞的制备技术 ⑴载体结合法 是将细胞悬液直接与水不溶性的 载体 相结合的固定化方法。 ⑵包埋法 将细胞定位于凝胶网格内的技术。 ⑶交联法 用多功能试剂对细胞进行交联的固 定化方法。 ⑷无载体法 靠细胞自身的絮凝作用制备固定 化细胞的技术。 三、固定化方法与载体的选择依据 ⒈固定化方法的选择 ⑴固定化酶应用的安全性 ⑵固定化酶在操作中的稳