广西圆斑蝰蛇毒凝血因子X激活剂分离纯化及其止血作用的研究.pdfVIP

广西圆斑蝰蛇毒凝血因子X激活剂的分离纯化 及其止血作用的研究 摘 要 凝血因子X激活剂可以在血管破损处激活因子X，促进凝血酶生成，加速凝血过 程，以达到迅速止血的目的，因而具有潜在利用价值，有可能开发为强效的止血药。 X 本文应用层析方法从广西圆斑蝰蛇毒中分离纯化凝血因子X激活剂(factor activatorfromRussell’Svipervenom，RVV—VA)并观察其部分活性影响因素和 止血作用，旨在为进一步研发提供实验资料。 1．RVV-VA的分离纯化 DEAE 16／10 广西圆斑蝰蛇粗毒过HiPrep FF阴离子交换色谱，获得6个蛋白质 组分。采用测定复钙化时间，对各洗脱峰进行活性测定，发现组分V的促凝活性具 G-75凝胶过滤色谱纯化获4个蛋白峰，其 有钙依赖性。该组分浓缩后经Superdex 中第一峰具有凝血因子X激活活性。该组分经IO％SDS，在非还原性条件下呈 轻链(约21．5kDa)，暂名为RVV—VA。 2．影响RVV—VA活性的因素 在体外观察不同条件下RVV-VA对家兔血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)的影 温度低于40℃时活性变化不大，温度高于40C时活性迅速下降。EDTA可完全抑制 物(PMSF)对其无影响。 3．RVV-VA对正常小鼠出血时问(BT)和凝血时间(CT)的影响 小鼠尾静脉注射RVV-VA 5 药剂量。 4．RVV-VA对凝血功能障碍小鼠CT的影响 采用刖：素化和华法林化小鼠模型观察静脉注射RVV—VA对凝血功能障碍小鼠CT的 n(对照组)延长至5．25± 影响。结果显示，肝素模型组小鼠CT由1．53±0．30mi 表明造模成功。与相应的模型组比较，RVV—VA 3．70±0．28mi RVV—VA RVV-VA能一定程度减少肝素和华法林所致的出血倾向。 ． 5．RVV-VA对家兔全血凝固时间的影响 RVV—VA 及作用特点。结果发现家兔iv lOmin后CT 20mU／kg、5mU／kg或1．25mU／kg 给药后12h，RVV—VA 凝作用。 6．RVV-VA对家兔肝脏创伤出血模型出血时间和出血量的影响 采用家兔肝脏创伤出血模型，观察静脉注射RVV-VA前后家兔肝脏切口出血时间 和出血量的变化情况。结果显示，家兔ivRVV—VA 的血管有明显的止血作用。 7．RVV-VA对家兔APTT、PT和TT的影响 家兔ivRVV—VA 6 有损伤的动物没有促凝血作用。 结论：用层析方法可以从广西圆斑蝰蛇毒中分离得到凝m因子X激活剂，该激活剂具 有较强的止血活性。 [关键词]凝血因子X激活剂离子交换凝胶过滤lf：血作用蛇毒圆斑蝰小鼠家 兔 7 Haemostaticof Purificationand EffectFactorXActivator Venomof russelliiin from Vipera Guangxi Abstract Xactivatorcouldactivatefactor