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重组抵抗素成熟肽对猪葡萄糖与脂肪代谢的影响 摘要 抵抗素是由脂肪组织分泌的多肽类激素，与动物胰岛素抵抗、脂肪细胞分化、脂 肪代谢及脂肪沉积密切相关。本研究通过大肠杆菌表达重组抵抗素成熟肽，并采用肠 激酶消化以及Ni-NTA亲和层析纯化，获得具有生物学活性的重组抵抗素成熟肽 (matureresistin 对猪葡萄糖与脂肪代谢的影响。 (1)重组mRetn基因大肠杆菌中的表达 BL2 pET-mRetn转化E．coli 果表明，重组M．resistin融合蛋白分子量约29KD。对表达条件如重组菌密度、培养 温度、IPTG浓度及诱导时间进行优化并用SDS．PAGE检测。结果表明，在重组菌密 度OD600=0．5、培养温度37℃、IPTG浓度1mmol／L、诱导时间4h时，可溶性重组 M．resistin的表达量最高。 (2)重组M．resistin的分离与纯化 重组表达菌用含有1mg／mL溶菌酶的裂解缓冲液悬浮、超声波破碎细胞，上清 液用Ni-NTA亲和层析柱纯化，SDS凝胶上可检测到分子量为29KD的单一条 KD。 (3)抗猪M．resistin重组蛋白的多抗血清制备 天采血，用双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价为1：16，末次免疫后7天心脏 高；ELISA法检测其抗体效价，其效价为1：800。 T (4)重组M．resistin对猪葡萄糖与脂肪代谢的影响 ml 随机选取体重相近的雄性巴马香猪6头，每头动物依次接受以下3种处理：0．5 生理盐水，低剂量抵抗素(20 ng／mL)、高剂量抵抗素(40ng／mL)，其间休息5～7 天。于给药后0、1、2、3、4、6h采血，检测相关血液生化指标的变化。结果表明： 给予抵抗素后，巴马香猪血清葡萄糖(GLU)和低密度脂蛋白(LDL)水平有升高的 均显著降低，脂蛋白脂酶(LPL)活力显著下降；总胆固醇(TC)水平则无影响。上 述试验结果为进一步研究抵抗素的生物学功能奠定了基础。 关键词：抵抗素成熟肽(M．resistin)，代谢，猪， II MatureResistin on EffectsofRecombinant Peptide Glucoseand MetabolisminSwine Lipid Abstract isa tissueand ail Resisitin hormone secreted specific peptide byadipose playing ininsulin metabolismandfat role resistance，preadipocytesdifferentiation，lipid important the matureresistin was fragment deposit．Inpresentstudy,the peptide(M—resistin)gene in recombinantfusion was the Ecoli,the enterokinas